组培大实验安排.ppt

植物组织培养大实验安排 1、组织培养操作的一般流程为： 1） 器皿的洗涤 2） 培养基母液及常规试剂的配制 3）培养基的配制及消毒灭菌，相关用具的消毒灭菌处理 4）外植体的选择、处理、灭菌 5）接种 6）无菌培养 2、器皿的洗涤 新玻璃器皿在生产过程中常使玻璃表面呈碱性，并带有一些铅和砷等有害物质，同时常有大量的灰尘，因此用5%HCl浸泡12小时以上再洗，或注满水在高压锅里煮半小时，之后再洗；用过的器皿浸泡后煮沸30分钟，用软毛刷沾洗涤剂洗净后，清水冲洗、晾干，在洗液中浸泡过夜，一般清洁液具有很强的氧化作用，能将玻璃器皿上未刷掉的微量杂质清除掉。清水冲净后，再用蒸馏水漂洗，晾干后包装待灭菌。如果用过组织培养的玻璃器皿可简单洗涤。 橡胶、塑料器皿清洗后，置2%NaOH中浸泡过夜，洗净后再用5%HCl浸泡30分钟，清洗至中性后，蒸馏水漂洗，晾干包装灭菌（不能用洗液浸泡）。 3、培养基母液及常规试剂的配制 （所有药品均为分析纯） 第一组：配洗液。 第二组：配制1N 氢氧化钠、0.1 N 氢氧化钠、1N 盐 酸、0.1 N盐酸各50ml。 第三组：配制MS大量元素母液（×10）1000ml。 第四组：配制MS微量元素母液（×100）500ml。 第五组：配制MS铁盐母液（×100）500ml。 第六组：洗公用量筒（10 ml、50 ml、100 ml各6个） 洗公用烧杯（500 ml和1000 ml各4 个） 第七组：配制MS有机元素母液（×100）250ml。 第八组：配制2,4-D母液（1mg/ml）20-25 ml(先用 少量的1N氢氧化钠溶解，再加水定容)；配制6-BA 母液（1mg/ml）20-25 ml(先用少量的1N盐酸溶 解，再加水定容)。 第九组：配制NAA母液（1mg/ml）20-25 ml(先用少量 的1N氢氧化钠溶解，再加水定容)；配制KT母液 （1mg/ml）20-25 ml(先用少量的1N盐酸溶解，再 加水定容)。 第十组：配制75%乙醇1000 ml，分成两瓶装；配制 0.1%升汞溶液1000 ml。 第十一组：剪封口膜和棉线绳(保证够大家用的)；洗公 用量筒（1000、500、250、100 ml各2个） 第十二组：包滤纸包16个；包扎空的干净三角瓶 （100 ml广口） 16个。 第十三组：洗公用大三角瓶（250 ml的16个）；制无 菌水16瓶；包扎镊子、剪、手术刀16套； 第十四组：制酒精棉球2大瓶（广口瓶）。 第十五组：完成培养基及其他物品的灭菌任务。 每组还要洗三角瓶（广口100ml）4个；250 ml烧杯1个；滴管、玻璃棒各1个。 4、培养基的配制及消毒灭菌，相关用具的消毒灭菌处理 ⑴首先确定培养基配方，按配制培养基的量设计详细配制方案，让老师看过后在进行配制； ⑵在干净的烧杯中加入约75%终体积的蒸馏水→分别量取大量、微量、铁盐和有机元素母液加入→ 加入所需的蔗糖（g），搅拌溶解后，用量筒定容至终体积（ml）→用微量进样器加入所需激素→用pH计调pH值至5.9→加琼脂（g）→微波炉里熔化至透明→分装入培养瓶(每瓶约25ml) 4、培养基的配制及消毒灭菌，相关用具的消毒灭菌处理 → 封口，标记(组号，培养基种类)，于121℃，高温湿热灭菌20min→ 冷却后备用。 ⑶包扎的水、空三角瓶、镊子、剪、手术刀、滤 纸包等一起灭菌。 5、外植体的选择、处理、灭菌、剪切、接种、培养 ⑴叶片外植体或胡萝卜外植体或种子的处理 ⑵净化工作台的灭菌（紫外灯照射20min） ⑶外植体选取、处理、灭菌 ⑷外植体剪切、接种、培养 6、培养物的生长情况 愈伤组织的出现？不定芽的出现？ 污染材料的处理等 切取无菌苗下胚轴段培养 植物组培技术在生产实践中的用途 ◆培育单倍体植株，为作物育种提供纯合亲本 ◆原生质体培养，通过体细胞杂交进行育种 ◆珍稀名贵植物的快繁，濒危植物的物种的挽救 ◆植物次生代谢产物的工业化生产 ◆超低温保存种质和人工种子 消毒灭菌方法 分物理法和化学法 物理法：干热灭菌、湿热灭菌、紫外线照射、抽 滤灭菌、灼烧灭菌。 化学法：熏蒸灭菌、消毒剂灭菌、抗生素等。 根据前期文献检索查阅，以格丽海棠叶片和胡萝卜根作为两种不同的外植体，按照学号每2人一组，依次取相应材料为外植体（即第一组所取外植体为叶片、第二组为根、第三组为叶片，第四组为根—-----依次类推，设计针对不同外植体为材料的表面消毒灭菌方法（2种）和诱导愈伤及分化的不同激素配比培养基（2种）。