半滑舌鳎 StAR 基因的克隆和表达概述及性别相关基因(FTZ.docVIP

　　半滑舌鳎 StAR 基因的克隆和表达概述及性别相关基因(FTZ 第一章 文章综述 1 鱼类性别决定研究进展 脊椎动物在系统分化过程中有着丰富长繁杂的演化过程，对于性别的分化主要有两个阶段来决定，第一，性别决定，第二，性别分化。这两个因素共同决定了该物种的最后性别。鱼类性别分化是鱼类在发育过程中一个重要的环节，且性别分化过程由一系列的个体演化过程遗传来决定。性腺分化方向在整个分化过程中，主要是由一系列的性别分化机制决定的，即在分化过程中决定着性腺是向卵巢方向发育，或者向另一个方向，精巢方向分化。在性别分化过程中有两种固定的模式都会对性别产生影响，即基因和环境都会对性别有决定作用。 . 1.1性染色体的类型 在真核生物中性染色体（Sex chromosome）就是指与性别决定相关的染色体。如人的性染色体为 XY 型，分别来自父本和母本的两条异源染色体有十分明显的形态区别，如人类的 X 染色体和 Y 染色体相比而言，Y 染色体就比 X 染色体短很多，染色体长短的差异会造成遗传信息量会有明显的差异；而在鸟类中有同样的形态区别，鸟类的染色体类型为 Z,在电子显微镜下，会观察到一种电子致密体都是由一种没有质膜结构的生殖质结构物质组成[35]。研究发现在斑马鱼中，在胚胎的卵裂期的不对称分配会造成生殖颗粒的分配，事实上这些发育过程和方向在胚胎时期就已经由遗传因子决定了，因此可以说明，母源因子的发育主导着 PCG 细胞的发育，是一种细胞自主发育的过程[36]。对于卵母细胞的发育，会在发育过程中产生巴氏小体[37]。在非洲爪蟾中研究发现，这种巴氏小体会与一些生殖颗粒细胞的结构有很大的区别[38]，哺乳动物中的巴士小体一般会出现在卵母细胞，随着卵母细胞的成长会逐渐发生解体[39]。但是对于这个巴士小体在生殖细胞发育过程中的作用，以及和生殖颗粒之间产生的关系还没有得到准确的功能研究[40]。PCG 细胞的迁移是通过细胞的自主活动以及细胞的非自主活动共同决定的，同样受到一些趋化因子的影响[41],有研究认为，对于斑马鱼来说对于 PCGs 细胞的迁移还受到其他因素的影响，比如认为在细胞中存在某些排斥力和吸引力对其迁移过程造成影响。 .. 2.2 鱼类性腺的发育和分化 在鱼类中，除了原始细胞的分化，性细胞的分化过程完成后，比如卵巢腔或者精巢腔的形成，都是一些早期的性腺分化的标志[49]。鱼类精巢的类型总的来说可以分为两种基本类型，一种是管状结构，而另一种是叶状结构[50]。对于精巢的输精管主要是通过体腔细胞壁所产生的细胞衍生形成的。研究五棘刺鱼时认为生殖细胞衍生源头是精原细胞，精原细胞的发生往往会产生在间质细胞中。对于区分是否是初级精原细胞还是次级精原细胞主要是通过对细胞的大小来决定的，通常状况下初级精母细胞都要比次级精母细胞个体大。对于同一种鱼，卵巢的分化分期时间也不是绝对的，由于繁殖周期的不同发育结构的不同，卵巢的分化分为三种类型，这三种类型分别为分批非同步、分批同步和完全同步[51]。对于半滑舌鳎来说，卵巢的分化方式应该属于分批同步类型。卵巢的主要功能是在卵巢腔内形成并且保存已产生的卵子，到合适的时机通过输卵管排出到体外进行受精[52]。对于卵黄的结构主要分为三个时期，在卵原细胞形成卵母细胞的过程中，对于细胞质中的一些物质会发生变化，卵黄泡会出现且这些卵黄泡为含糖蛋白物质的主要积累，该物质的形成意味着第一卵黄形成期，随后的过程主要是积累脂蛋白，在颗粒物质形成的过程过程中进入第二、三期，最后若是观察到卵原变圆，这说明卵细胞的发育已经进入了成熟时期[53]。鱼类卵黄的合成，是通过细胞内的自身合成和细胞外的合成两种方式共同结合相互作用，从而进行合成的。此过程的诱导物主要是雌二醇[54]。 第三章 半滑舌鳎 StAR 基因克隆及表达分析.......... 19 1 引言 ....... 19 2 实验材料和试剂 .... 19 3.2 半滑舌鳎 StAR 基因的全长 cDNA 的克隆.......... 22 3.2.1StAR 基因的全长 cDNA 的克隆 ......... 22 3.2.2 序列分析和拼接 ...... 26 3.2.3 基因的 RT-PCR 分析和荧光定量 PCR 分析 ...... 27 3.2.4StAR 基因的原位杂交分析 ..... 27 4 实验结果 .......... 32 4.1 半滑舌鳎 StAR 基因 cDNA 全长克隆及序列分析 ....... 32 4.2StAR 基因序列分析及进化树构建 ..... 32 4.3 半滑舌鳎 StAR 基因的 cDNA 序列全长分析 .... 34 4.4 半滑舌鳎StAR 基因的组织分布 ....... 35 4.5 半滑舌鳎 StAR 基因的定量表达分析 ......