基因工程论文参考资料：大豆GmGBP1基因加入光周期开花路径及逆境反应之功能分析.docVIP

　　基因工程论文参考资料：大豆GmGBP1基因加入光周期开花路径及逆境反应之功能分析 1 前言 1.1SKIP 基因概述 SKIP 基因最早在果蝇中发现[1, 2]，随后经酵母双杂交证实其能与致癌基因 Ski 互作，将之命名为 SKIP[3]。SKIP 是真核生物中的转录共激活子，在转录和剪切中发挥保守的共激活的作用，所有的已发现的 SKIP 同源蛋白均包含具有 S-N-YB 的研究首次报道 GAMYB 能与含有 SKIP 结构域的一段多肽蛋白互作，但是并未得到 SKIP 的全长序列，且无后续的功能分析[9]。在水稻中，OsSKIP 定位于细胞核中，其表达受多种逆境和激素的诱导，包括脱落酸（ABA），茉莉酸甲酯（JA），水杨酸（SA），乙烯，生长素，赤霉素，激动素，油菜素类固醇，盐，干旱，低温，伤害等；OsSKIP 能与酵母的 SKIP（PRP45）突变体互补并且调节水稻细胞活力及逆境胁迫耐性；在水稻中降低 OsSKIP 的表达降低了水稻细胞活力并抑制水稻植株的生长；OsSKIP 过表达水稻植株显著提高了水稻的活性氧（ROS）清除能力并调控数个逆境胁迫相关基因的表达，包括STRESS-RESPONSIVE NAC 1 (SNAC1)，C-REPEAT-BINDING FACTOR 2 (CBF2)，PROTEINpHOSpHATASES 2C (PP2C)和 RESPONSIVE TO DESSICATION 22 (RD22)；通过酵母双杂交筛选到超过 30 个的 OsSKIP 互作蛋白[10]。在拟南芥中，AtSKIP 定位于细胞核中，过表达拟南芥植株能提高其对高盐和干旱的抗性，使其对 ABA 不敏感[11]；AtSKIP 受细胞分裂素诱导并参与细胞周期信号传导[12]；AtSKIP 可以与剪接体剪接因子蛋白 45 结合并通过 mRNA 生物钟基因如 PPR7，PPR9 调节基因 5#39; 和 3#39; 端的剪接位点的识别来调节基因的可变剪接[13]；AtSKIP调节拟南芥的昼夜节律钟影响植株花期[13]。在大豆中，本实验室发现 GmGBP1 的表达受短日照诱导[14, 15]。 1.2大豆光周期现象的研究进展 在研究植物光周期反应的早期，大豆常被作为研究光周期现象的模式植物[16-20]，并发现了许多重要的光周期现象，如暗期的重要性等。大豆是典型的量性短日照作物, 每个大豆品种的适应范围很窄(纬度 1～1. 50)[21]，光照不仅影响大豆的开花时间还影响大豆的品质和其他的农艺性状。不同品种大豆的感光性并不一样。许多研究证明大豆在全生育期（出苗至成熟）都具有很强的感光性，其生育期（开花期与成熟期）特别是开花期为光周期反应的重要生态指标。经典遗传学研究发现了 9 个与开花期相关的基因[22-29]，除与长童期相关的 J 位点[26]外，其余习惯称为 E 系列(E1 至 E8)基因；特别是 E1、E3、E4 和 E7 位点均与大豆光周期敏感性相关[22-25, 30-32]。迄今已明确 E1、E2、E3、E4、GmFT2a/GmFT5a 和 Dt1 等位点的功能基因，并进行了相关的功能验证。但人们尚不知晓 E5、E6、E7、E8、J 及新近发现的 QTL 的分子基础。在众多的 E 基因中，大豆生育期基因 E1 对大豆的开花期及成熟期的影响最大[22, 32-35]，E1 位点被遗传定位到连锁群 C2 上[35-37]。Xia 等[37]用 2 个含有不同 E1 基因型的 Harosoy 近等基因系所建立的群体，成功地实现了该基因的精细图位克隆。进一步分析表明，E1 基因含有一个双边的(Bipartite)核定位信号(NLS)和 DNA 结合位点，并含有一个与 B3 远缘相关的结构域[37]；E1 的表达在短日条件下受到明显抑制，其主要原因可能是大豆为短日植物。E1 基因抑制植物开花[37-39]，E1 基因的变异与开花期表型密切相关[37]。在已发现的 E 系列基因型中，E1 基因型抑制开花的能力最强。大豆 E 系列基因中，E4 是最先被克隆并经功能验证的基因,该基因为光敏色素 Phytocrome A 基因 3 个拷贝之一 GmpHYA2[40]。在该基因的第 1 个外显子中插入了类似于 Ty1/copia-like 的转座子引致 E4 基因的功能缺失，形成 e4 基因型。e4 基因型需要在隐性 e3 基因型同时存在时，才引致光周期不敏感性[40, 41]。在长日条件下，其中 E3位点在不同光质量条件下延迟开花的程度相似，说明 E3 位点对光质量并不敏感[31]图位克隆法成功得到克隆 E3 基因并证明为光敏色素 Phytocrome A 的 3 个拷贝之一 GmpHYA3[42]。E3与 E4 同为光敏色素基因，此研究