新的抗分化基因HA117的鉴定、功能概述及临床意义.docVIP

　　新的抗分化基因HA117的鉴定、功能概述及临床意义 前 言 肿瘤是严重威胁人类健康的主要疾病之一。目前恶性肿瘤占我国人口死亡原因的第二位，其发病率以每年3%～5%的速度递增。据调查预测，2020年我国将有约400万人发生癌症，约300万人死于癌症；2030年将有约500万人发生癌症，约350万人死于癌症。肿瘤细胞对化疗药物发生多药耐药是导致肿瘤化疗失败的最主要原因。在白血病治疗中，我国学者首创使用全反式维甲酸 (all-trans retinoic acid,ATRA) 治疗急性早幼粒细胞白血病 (acute promyelocytic leukemia, APL)，取得了重要的进步。ATRA的应用，开创了肿瘤的诱导分化治疗这一新领域。APL 是急性髓细胞性白血病 (acute myeloid leukemia, AML) FAB 分类中的 M3亚型，以特异的染色体易位 t (15, 17)(q22, q21)为特征，在 APL 患者中占 95%以上。易位使 15q22 的早幼粒细胞基因(PML)和 17q21 的维甲酸受体基因(RARalpha;)形成PML-RARalpha; 融合基因，该融合基因是 APL 发病的分子基础。PML-RARalpha; 能与维甲酸 X 受体 (retinoid X receptor, RXR)形成二聚体，继而绑定到维甲酸反应元件(RARE)，使正常的 RARalpha; 被扣押，导致正常的基因转录受到抑制。药理浓度(10-6ndash;10-7M)的 ATRA 可以绑定到 PML-RARalpha;，该亲和力可以与 RARalpha; 相比，从而诱导 APL 细胞分化，形成粒细胞，实现临床缓解。ATRA 治疗作用的其他机制还包括：泛素/蛋白酶体系统介导的PML-RARalpha;的降解，其依赖于SUG-1绑定到RARalpha;上的 AF-2 反式激活结构域[1]；自噬在 ATRA 治疗过程中发挥的重要作用[2]；PML-RARalpha; 介导转谷氨酰胺酶Ⅱ（TgaseⅡ）表达而参与 ATRA 诱导细胞分化过程[3]；RARalpha; 表达上调介导 ATRA 的诱导作用[4-5]；诱导瘤细胞凋亡，等等。但是 ATRA单用不能维持缓解，在 ATRA 使用后 1-3 月，耐药性形成，几乎所有的患者会在 3个月到 1 年复发。 研究认为 ATRA 耐药的机制包括：ATRA 的代谢加速；细胞内细胞视黄酸结合蛋白 (CRABPs)的表达增加；PML-RARalpha; 的结构性降解；PML- RARalpha; 上 RARalpha; 的配体绑定区域的点突变；P-糖蛋白表达增加；组蛋白去乙酰化酶活性的转录水平抑制；端粒酶的持续活性，等等。为探讨ATRA耐药的原因，本课题组前期在对已知肿瘤耐药相关基因进行研究的基础上，从基因差异表达角度入手，以诱导分化研究中经典的髓系白血病细胞株HL-60为研究对象，就可能参与调控HL-60/ATRA耐药株的继发多药耐药相关基因进行了一次大范围的筛选。我们以ATRA小剂量、反复多次、浓度递增的方式诱导HL-60细胞对ATRA耐药，最终建立了HL-60/ATRA多药耐药的细胞模型。在此基础上，我们采用抑制消减杂交方法建立了HL-60/ATRA的消减文库并获得433个阳性克隆，以433个阳性克隆制备基因芯片并筛选出ratio值大于3的克隆112个，之后又挑选了其中12个呈高强度差异表达的基因克隆进行序列同源性分析，发现克隆号为117的序列是未知序列 (在Genebank中获取登录号CB214920)，本课题组将该新基因命名为HA117[6]。多药耐药性 (multidrug resistance，MDR)指对一种药物具有耐药性的同时，对其他结构不同、作用靶点不同的抗肿瘤药物也具有耐药性。经典的、研究最多的多药耐药相关基因主要包括多药耐药基因 (multidrug resistance 1, mdr1)、多药耐药相关基因1 (multidrug resistance-associated protein 1, mrp1)、肺耐药相关蛋白 (lungresistance-related protein, lrp)、谷胱苷肽-s转移酶 (glutathione S-transferase pi;, gst-pi;)和抗凋亡相关基因，如Bcl-2等[7-9]。在我们的前期研究中，HA117基因具有多药耐药作用[10-12]，在白血病细胞和乳腺癌细胞中HA117的多药耐药指数与mdr1相近，而较mrp1为高。总结分析，HA117是一个ATRA长期刺激下在HL-60/ATRA多药耐药细胞株里差异高表达的基因，其高表达与HL-60/ATRA细胞对抗ATRA的诱导分化的作用相关联，