用高代数小鼠胚胎干细胞制作嵌合体小鼠.pdfVIP

第26卷第1期 佛山科学技术学院学报(自然科学版) Vo1．26 NO．1 2008年 1月 Journal of Foshan University(Natural Science Edition) Jan．2008 文章编号：1008一O1 71(2008)01—0068—05 用高代数小鼠胚胎干细胞制作嵌合体小鼠 刘容珍 ，李万利 ，施振旦 ，陈学进。，田允波 (1．伸恺农业技术学院生命科学学院。广东广州510225；2．华南农业大学动物科学学院+广东广州510642； 3．上海市发育生物学重点实验室，上海 200025) 摘要：为了检验胚胎干的全能性．通过用1日龄卵巢移植后+经体外受精得到的囊胚的饲养建立了小鼠的ES 系+并在较高的代数下(第41代)／Vl出了5只毛色嵌合体小鼠+但是没有得到性腺嵌合的小鼠。研究结果证实+ 高代数的ES细胞仍然具有构建嵌合体的能力。 关键词：胚胎干细胞：嵌合体；显微注射；小鼠 中图分类号：Q959．837 文献标识码：A 早在1901年Spemann_l 就开始了对两栖动物嵌合体的培育研究，用来探索两栖动物的胚胎发育规 律。在哺乳动物中，Tarkowski Ez2制作了首批嵌合体小鼠，但遗憾的是该小鼠存活不久就死了。随后，在 绵羊、大鼠、家兔、牛和猪等动物身上相继获得了嵌合体。同时，在种间嵌合体上，小鼠一大鼠、牛一水牛、 绵羊一山羊的嵌合体也先后得到。哺乳动物的嵌合体可用于生理学、行为学和生物发育学的研究。早期 嵌合体主要用于研究动物发育的生物学问题，近年来则常用作研究胚胎发育和遗传变异的理想材料。 目前随着各种动物胚胎干细胞(Embryonic Stem，ES)系的建立，嵌合体则是用来作为检验ES细胞 全能性的一个重要标志。然后通过对ES细胞的基因改造，进而获得转基因的动物或各种疾病的动物模 型。本实验室建立了来源于 1日龄的小鼠胚胎的ES细胞系。通过囊胚注射的方法制作嵌合体，进而检 验ES细胞的全能性。在用ES细胞制作嵌合体的报道中，大家通常采用早期的ES细胞(通常在14代以 内)来制作嵌合体。本研究用高代数ES细胞来制作嵌合体，从而为制作转基因动物、动物生物反应器、 动物疾病模型建立技术平台。 1 材料与方法 1．1 试剂 DMEM(高糖)(Cat．No．12430—054，GIBCO)；FBS(Cat．No．SH30070．03，HYCI ONE)；0．05 Trypsin／EDTA (Cat．No．25300—054。GIBCO)；Mineral oil(Cat．No．M一8410，SIGMA)Grelatin (Cat．No．G一25OO。SIGMA)；PBS(Cat．No．14190—136，GIBCO)；P／S(Cat．NO．1514O一122， GIBCO)；PMSG(天津市华孚高新生物技术公司)；HCG(天津市中宝药业有限公司)；HEPES(Cat．No． 1 630—080，GIBCO)；mI IF (Cat．No．ESG11O7，CHEMIC()N)； —Mercaptoetl1an0l(Cat．No．21985— 023，GIBCO)；Hanks(Cat．No．14180—053，GIBC())；速眠新Ⅱ(长春军需大学兽医研究所)；HCZB冲 卵液；CZB培养液。 1．2 实验设备 显微操作仪(日本)；倒置显微镜(日本，OI YMPUS IXT0)；Spindle View成像系统；CO：培养相(德 收稿日期：200 —l2-07 作者简介：刘容珍(1953一)．女．广东怫山人．仲恺农业技术学院高级兽医师 第1期 刘容珍等：用高代数小鼠胚胎干细胞制作嵌合体小鼠 69 国，HEAR Ce11)；体式解剖镜(德国，ZEISS)；冷光源(日本，OI YMPUS)；拉针仪(日本，PN一30)；断针 仪(日本，MF一900)；磨针仪(日本，EG一400) 1．3 实验动物 购自上海中科院试验动物研究中心KM小鼠。 1．4 ES细胞的培养 通过将1日龄雌鼠小鼠lC57×BAB[ ／c)的卵巢进行异体移植，再通过体外受精获得囊胚并进行培 养ES细胞系。将ES细胞培养在经丝裂霉素处理的滋养层细胞上，每4天传一