高效液相色谱化学发光法测定人体血清中的重酒石酸去甲肾上腺素.pdfVIP

第 21卷第 2期 海南师范大学学报 (自然科学版) Vo1．21 No．2 2o08年6月 Journal of Hainan Normal University(Natural Science) Jun．2008 高效液相色谱化学发光法测定人体血清中的 重酒石酸去甲肾上腺素 张迎春 ，张迎雪 ，徐德泉 (1．沈北新区中心医院，辽宁 沈阳110121； 2．琼州学院，海南 五指山572200) 摘 要：基于铁氰化钾与碱性鲁米诺溶液混合产生化学发光，重酒石酸去甲肾上腺素的存在 可以大大增强其化学发光强度．建立高效液相色谱化学发光法测定人体血清中的重酒石酸去甲肾 上腺素的方法：在C 8反向柱上，室温，流速为 1．0 mlJmin，流动相为邻苯二甲酸氢钾O．01 mol／L、甲 醇(V流动相： 甲醇=92：8，pH 4．5)．鲁米诺溶解于NaHCO3-NaOH缓冲液中，且pH值等于9．8．实现 了对人体血清中重洒石酸去甲肾上腺素的分离与测定．方法的线性范围为5~10-s g／mL r≥ 0．999 1)。检出限为 1．13~10 g／mL．对5~10-s g／mI 的重酒石酸去甲肾上腺素连续进行 11次平 行测定的相对标准偏差为2．6％．样品在一2O cI=下保存，稳定性较好．该法准确、快速、灵敏、简单。 可用于去甲肾上腺素的生物体液分析和，临床药学研究． 关键词：高效液相色谱：化学发光；人体血清；重酒石酸去甲肾上腺素 中图分类号：R 917 文献标识码：A 文章编号：1671—8747(2008)02—0176—04 去甲肾上腺素(Noradrenaline)是肾上腺素能神经的主要神经递质，主要激动 受体，对 受体激动作 用很弱。具有很强的血管收缩作用．其兴奋心脏及抑制平滑肌的作用都比肾上腺素弱．临床上主要利用它 的升压作用，以保证对脑等重要器官的血液供应u ．目前报道的测定去甲肾上腺素的方法有荧光法 ]、 毛细管电泳法 、电致化学发光法隅]，高效液相色谱法[9-173．高效液相色谱法多用电化学检测器 J州和 荧光检测器[13-17]．而与化学发光检测器联用技术只见一篇报道 ． 近年来。联用技术的探索一直是分析领域的研究热点，而高效液相色谱与化学发光的联用更是一个亮 点．本文研究发现，铁氰化钾在碱性条件下(NaHCO 一NaOH缓冲溶液，pH=9．8)能够氧化鲁米诺产生化学 发光。重酒石酸去甲肾上腺素存在可以大大增强其发光强度．基于此，结合高效液相色谱分离技术。在C 。 反相键合色谱柱上，流动相为邻苯二甲酸氢钾(O．01 tool／L)：甲醇等于92：8(体积比)，pH值等于4．5的条件 下，实现了对人体血清的重酒石酸去甲肾上腺素分离与测定．本方法流路简单，不需程序梯度洗脱，不需柱 前衍生，不需外加光源，从而消除了散射光对测定的影响，大大提高了灵敏度和准确度． 1 实验部分 1．1 仪器和试剂 D一7000型高效液相色谱仪(El立公司)；HL一2恒流泵(上海青浦沪西仪器厂)；MCFL—A型多功能化学 发光／生物发光分析系统(西安瑞迈电子科技有限公司)；微超滤管(VIVASPIN 100 L)． 收稿日期：2007—12—18 基金项目：国家自然科学基金资助项目 }通讯作者 第2期 张迎春等：高效液相色谱化学发光法测定人体血清中的重酒石酸去甲肾上腺素 177 重酒石酸去甲肾上腺素 (中国药品生物制品检定所)配成浓度为1．0xl0 g／mL的储备液；0．01 molFL Luminol储备液；K3Fe(CN) (成都化学试剂厂)配成1．0xl0 moUL储备液；0．01 mo／L邻苯二甲酸氢钾(上海 试剂三厂)储备液；甲醇(天津四友生物技术有限公司)；血清样品由辽宁省沈阳市沈北新区中心医院化验 室提供．其余试剂均为分析纯．水为二次蒸馏水． 1．2 实验方法 分别将流动相和K。Fe(CN) 溶液、Luminol溶液(NaHCO