钾通道阻断剂对人乳腺上皮细胞MOF10A增殖的影响.pdfVIP

第31卷第2期 辽宁师范大学学报(自然科学版) Vo1．31 No．2 2008年 6月 Journal of Liaoning Normal University(Natural Science Edition) Jun． 2008 文章编号：1000—1735(2008)02—0213—04 钾通道阻断剂对人乳腺上皮细胞MOFI OA增殖的影响 邹 伟 ， 张 磊 ， 王 曦 ， 周士胜 (1．辽宁师范大学 生命科学学院辽宁大连 116029；2．大连大学 医学院辽宁大连 116022) 摘 要：探讨电压门控钾离子通道在乳腺上皮细胞增殖过程中的作用．通过MTT法检测了钾通道阻断剂TEA、电压 门控钾通道阻断剂4-AP对人乳腺上皮细胞 MCF10A增殖的影响并与乳腺癌细胞MCF7作了比较，免疫印迹方法观 察了电压门控钾通道Kv1．2、Kv1．5的表达．研究发现，两种钾离子通道阻断剂对人乳腺细胞和乳腺癌细胞增殖的影 响均呈剂量依赖性关系．经5 mmol／L TEA处理72 h后，MCF10A细胞的生长抑制率为21．67 ，而MCF7细胞的生 长抑制率为41．36 ；5 mmoI／L 4-AP处理72 h后，MCF10A的生长抑制率为29．24 ，而MCF7细胞的生长抑制率 为4O．24 ．Kv1．2在MCF10A和MCF7中表达没有变化．而Kv1．5在MCF10A细胞中的表达明显高于MCF7细 胞．提示电压门控钾离子通道在乳腺细胞的增殖中起重要作用，其中Kv1．5可能和乳腺细胞的转化密切相关． 关键词：电压门控钾离子通道；乳腺癌；增殖 中图分类号：Q253 文献标识码：A 钾离子通道(K 通道)是细胞膜上一类特殊的四聚体蛋白质微孑L道，参与细胞内多种重要生理活动 的调节，例如，细胞的增殖、溶质转运、体积控制、酶的激活、细胞分泌、基因表达、兴奋的传导及细胞内通 讯等．近年研究表明，K 通道与癌症的发生、转移等过程有密切关系[1]．Ouadid等(2000)曾在乳腺癌细 胞MCF7上记录到电压依赖性TEA敏感的钾离子电流，首次发现MCF7细胞有明显的电压依赖性K 通道(Kv)亚型Kv1．1蛋白的表达[2]．Abdul等(2003)检测了6O例乳腺癌标本 Kv1．3蛋白的表达，发 现3O 高表达，35％中度表达，只有12％低表达[3]．最新研究发现，人乳腺癌细胞MCF7存在多种亚型 的K 通道(如Eagl，KCNQ1，Kcnk9，BKCa等)，它们可以通过调节细胞内信号等机制影响乳腺癌细胞 的增殖、生长和癌变．研究还发现，K 通道的激活剂能促进乳腺癌细胞的增殖，阻断剂则明显抑制乳腺 癌细胞的增殖 引．但是，到目前为止，正常乳腺上皮细胞转化和癌变过程中不同的K 通道亚型的作用 研究尚未见报道． 本文检测了钾通道阻断剂四乙胺TEA、电压门控钾通道阻断剂四氨基吡啶4一AP对人乳腺上皮细 胞MCF10A增殖的影响并与乳腺癌细胞 MCF7作了比较，观察了两种电压依赖性K 通道 Kv1．2、 Kv1．5在人乳腺上皮细胞MCF1OA和乳腺癌细胞MCF7中的表达，以期了解不同亚型的K 通道在乳 腺细胞转化中的作用，为进一步了解乳腺癌发生机制提供理论依据． 1 材料与方法 1．1 材料 人乳腺上皮细胞株MCF10A购于美国ATCC细胞库；人乳腺癌细胞系MCF7由大连中心医院中心实 验室馈赠；DMEM／F12培养基、马血清(美国Hyclone公司)、RPMI 1640培养基(美国Invitrogen公司)、新 生牛血清(GIBCO公司)；Kv1．5、Kv1．2抗体(Chemicon公司)；羊抗兔IgG-HRP(J~,京中杉金桥生物公司)； ECUM试剂(美国Amersham Biosciences公司)；四乙胺TEA、四氨基吡啶4-AP(Sigma公司)． 1．2 细胞培养 MCF10A细胞的培养方法，参见文[7-1．用含有马血清(5％)、胰岛素(insulin，10 ug／mL)、霍乱毒素(chol— eratoxin，100 ng／mL)、EGF(20 ng／mL)、氢化可的松(hydrocortison，1．4×10 M)的DMEM／F12培 收稿日期：2007—12—18 基金项目：国家自然科学基金资