应用HPLC法准确测定甘露醇注射液药液残留.docVIP

应用HPLC法准确测定甘露醇注射液药液残留摘要： 本文作者以高效液相色谱法测定甘露醇注射液药液残留，此法简便灵敏，结果准确可靠，适用于甘露醇注射液药液残留的检测。 关键词： 高效液相色谱法 甘露醇注射液 药液残留 高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）是在经典液相色谱法的基础上，于20世纪60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱；又因分析速度快而被称为高速液相色谱。高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法，与经典液相色谱相比，具有速度快、分辨率高、灵敏度高、样品量少、容易回收和色谱柱可反复使用等优点［１］。它由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。如HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳；进样系统要求进样便利切换严密；由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压，高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱［２］。 甘露醇为脱水药，主要用20％的高渗溶液静脉注射或静脉点滴。静脉注射后其脱水作用可迅速降低颅内压和眼内压，是治疗脑水肿、降低颅内压安全而有效的首选药物；也可用于急性肾衰早期，其可增加肾血流量，提高肾小球滤过率，增加尿量，从而防止肾小管萎缩、坏死，改善肾缺血［３］。甘露醇注射液为超饱和溶液，主药成分为甘露醇。因其浓度高，为防止对其他药品的生产造成影响［４］，所以必须对其进行药液残留检测。根据相关技术指导原则［５］，生产用配液罐、管道等部位清洗液的药液残留限度为1.0mgmL-1。在药液残留检测的研究过程中，本试验采用高效液相色谱法，以磺酸型聚苯乙烯与二乙烯苯共聚体阳离子交换树脂H型为填充剂（8μm，300mm×7.80mm），0.04mol/L磷酸溶液为流动相，以紫外检测仪为检测器，建立其检测方法［６］，［７］。经药品质量标准分析方法验证，本方法简便灵敏，结果准确可靠，适用于甘露醇注射液药液残留的检测。 1.仪器与试药 1.1仪器 梅特勒AE－240电子天平（上海）；岛津高效液相色谱仪：LC-10ATvp型液相泵，SPD-10Avp型紫外检测器。 1.2试药 甘露醇对照品（由中国药品生物制品检定所提供）；磷酸为色谱纯；水为二次蒸馏去离子水；甘露醇注射液250ml；甘露醇50g。 2.色谱条件与色谱图 2.1色谱条件 色谱柱：以磺酸型聚苯乙烯与二乙烯苯共聚体阳离子交换树脂H型为填充剂（8μm，300mm×7.80mm）； 流动相：0.04mol/L磷酸溶液为流动相； 检测波长：200nm； 流速：1.0mlmin-1； 柱温：50℃； 进样量：20μL。 2.2对照品溶液制备 精密称取甘露醇对照品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含甘露醇 1mg的溶液，作为对照品溶液。 2.3供试品溶液制备 取生产用配液罐、管道等部位清洗液。 在上述条件下，分别取对照品溶液与供试品溶液各20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图，甘露醇出峰时间为6.80min，理论板数按甘露醇峰计算应不得低于2000，对照品色谱图见下图。 3.方法学验证［８］ 3.1线性范围 精密量取甘露醇对照品适量，分别用水溶解并稀释成每1ml含甘露醇10mg的溶液，作为储备液。精密量取储备液0.1，0.3，0.5，1.0，1.5，2.0mL分别置10mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。以样品浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，进行线性回归，得回归方程如下： A甘露醇=1.0642×106C＋324，r=0.9995 试验结果表明，甘露醇在0.1～2.0mgmL-1范围内，其浓度与峰面积线性关系良好。 3.2精密度试验 精密量取对照品储备液1.0mL，置于10mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。连续进样5次，以峰面积计算，RSD为0.5%。 3.3最低检测限的测定 用3.2中的对照品溶液，采用逐步稀释法，按上述色谱条件进样，稀释至1500倍时，测得甘露醇的检测限（S/N=3）为2.0μgmL-1。 3.4回收率试验 精密称取甘露醇对照品8mg，10mg，12mg，分别置10ml容量瓶中。每个浓度各3份，共9份，分别加水溶解并稀释制成溶液，摇匀，作为供试品溶液； 另精密称取甘露醇对照品适量，加水溶解并稀释制成每1ml中约含甘露醇 1mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。分别取对照品溶液及9份供试品溶液各