嘉磷塞在植物体中之抗性.PDFVIP

第1頁 共1頁 嘉磷塞在植物體中之抗性 王慶裕 國立中興大學農藝學系 一、前言 嘉磷塞(glyphosate)是一種非選擇性 (non-selective)除草劑 ，雖然可以有效地 防除大部分雜草 ，但也容易傷害或殺死栽培作物。因此 ，若能發展出抗嘉磷塞之 作物 ，必然可以提高此類除草劑之利用效率。Schmidt and Pannell (1996) 曾敘述 在西澳洲之雜草會對傳統使用的除草劑產生抗藥性 ，尤其是 ryegrass(Lolium rigidum) ，為了解決抗性雜草產生之問題 ，乃使用非選擇性除草劑嘉磷塞。因為 嘉磷塞使用於輪作羽扇豆(lupins)之田間除草時 ，此植物也會受到傷害 ，故利用 遺傳工程技術使羽扇豆具有抗性基因。氏等評估指出發展抗性羽扇豆且配合其他 物理方式防除雜草 ，將可提高 33%收益。此外嘉磷塞抗性應用於大豆作物上已有 成功之案例(參考 劉和王 ，1997) ，而在其他作物如菸草、棉花、胡蘿蔔中 ，亦 有抗性品系出現 ，本文乃針對可能存在之抗性機制及案例作一說明。 二、抗性植物產生之原因與實例 1 、EPSPS 基因之增幅 由於嘉磷塞之作用位置(target site)是針對位於葉綠體或質體上之 EPSPS 合 成酵素(5-enolpyruvylshikimate 3-phosphate synthase; E.C. 2.5.1.19; EPSPS) 。 因此 ，若能維持此一酵素功能 ，必然可以增加植體對於嘉磷塞之抗性 ，而其 中之一種方法即是將控制 EPSPS 合成之基因增幅(amplification) ，使植體能 產生更多的 EPSPS 酵素蛋白以對抗嘉磷塞。Jones et al.(1996)分別針對具嘉 磷塞抗性之菸草細胞及再生小株(plantlets)調查其 EPSPS 增幅基因之表現及 穩定性 ，結果發現抗性細胞生長在不含嘉磷塞之培養基中 ，其增幅之 DNA 可以保持三年 ，而在再生小株中之表現與抗性細胞亦類似 ，且 EPSPS mRNA Lab of Herbicide Physiology 第2頁 共2頁 也過度表現(overexpressed) 。然而 ，若是與維持在嘉磷塞選拔壓力下之抗性 細胞比較 ，生長在不含嘉磷塞培養基中之細胞系(cell lines)抗性減少七倍 ， 再生小株之抗性則減少近乎 20 倍。後者抗性降低原因與 EPSPS mRNA 含量 降低有關。 Shyr et al.(1992) 曾以胡蘿蔔細胞懸浮培養，利用嘉磷塞進行耐藥性之逐步選 拔(stepwise selection) ，結果發現隨著每次的選拔，EPSPS 酵素活性、mRNA 及結構基因複製數目(copy number)均隨之增加，因此氏等認為嘉磷塞之耐性 乃是由於 EPSPS 基因逐步增幅所致。此外氏等並指出根據增幅現象之穩定 性，此增幅基因並非染色體外之基因。 有關 EPSPS 增幅基因 DNA 構造，Suh et al.(1993) 曾針對具嘉磷塞抗性之胡 蘿蔔懸浮培養細胞系研究，發現來自具高度抗性細胞系之增幅 DNA 片段大 小不同於其親本系，進一步分析顯示出二種不同之 DNA 構造。其中 13kb 大小之克隆(clone)僅含一份 EPSPS 基因複製(copy) ，而另一16kb 大小的克 隆則含基因之反轉複製(inverted duplication) 。以胡蘿蔔 DNA 探針進行南方 墨點法(southern blot)分析顯示，在除草劑選拔過程中未反轉之重複 DNA 構 造(uninverted repeated DNA structure)存在於所有的細胞系中，而反轉重複 (inverted repeat; IR)僅存在於高度增幅之DNA 中。在高度增幅之細胞系 T35G 中，上述二種構造乃等量存在，此細胞系之