烟草Nt—syr1基因实时荧光定量PCR检测方法.pdfVIP

中国烟草科学 2008，29(3)：20—24，28 烟草Nt—syrl基因实时荧光定量PCR检测方法 代晓燕1,2苏以荣 ，魏文学 ，陈风雷3 邹 焱4，龙 文3 贾志红1,5，范业宽2 (1．中国科学院亚热带农业生态研究所亚热带农业生态重点实验室，长沙 410125；2．华中农业大学资源与环境学院，武汉 430070；3．贵州省铜仁地区烟草公司，贵帅I铜仁 554300；4．贵州省烟草科学研究所，贵阳 550003；5．长沙卷烟厂技术中心， 长沙 410007) 摘 要：根据烟草Nt—syrl基因mRNA序列设计特异gI物，建立了SYBR Green I实时荧光定量PCR反应体系，对烟株打 顶后叶片Nt—syrl基因进行了mRNA转录水平上的定量分析，为从分子生物学水平上研究烤烟钾素营养调控机理提供新的技 术手段。该方法简单实用，获得的荧光定量PCR扩增曲线基线平整，指数区扩增明显，斜率大；稳定性和重现性好，变异 系数小；循环闽值ct与PCR起始模板量的对数值之间存在良好的线性关系。对基因表达结果分析表明，烟株打顶后1 h， Nt—syrl基因在叶片中强烈表达，表达量约是同期不打顶处理的480倍，随后逐渐降低。与打顶处理相比，打顶后涂抹生长 调节剂可以降低其表达量。 关键词：实时荧光定量PCR；烟草；Nt—syrl；基因表达 中图分类号：TS411 文献标识码：A 文章编号：1007—5119(2008)03—0020—06 A Real--time Fluorescent Quantitative PCR for Detecting Transcripts of Nt--syrl Gene in Tobacco DAI Xiaoyan ，SU Yirong ，WEI Wenxue ，CHEN Fenglei ，ZOU Yan ， L0NG Wen ．JIA Zhihong ．FAN Yekuan‘ (1．The Key Laboratory of Subtropical Agro—ecology,Institute of Subtropical Agriculture，CAS，Changsha 410125，China；2．College of Resource and Environment，Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China；3、Tongren Tobacco Company，Tongren Guizhou 55430o，China；4．Guizhou Tobacco Research Institute，Guiyang 550003，China；5．Technical Center of Changsha Cigarette Factory,Changsha 410007，China) Abstract：The project aimed to establish real·-time fluorescent quantitative PCR detecting Nt·-syrl gene in tobacco and provided a new technique for the mechanism study of potassium regulation at the molecular leve1．By designing two pairs of amplification primers based the mRNA sequence of Nt．syrl in tobacco and establishing SYBR Green I reaction system of real—time fluorescent quantitative PCR，quantitative analysis was conducted to detect the changes of Nt—syr