斑点杂交技术用于蛙钩端螺旋体病的流行病学调查研究.pdf

·341 · 文章编号：1003-4692（2009）04-0341-03 【论著】 斑点杂交技术用于蛙钩端螺旋体病的 流行病学调查研究 王兆芬 ，蒋秀高 ，李秀文1 2 2 【摘要】 目的 用Dotblotting杂交技术检测蛙类钩端螺旋体（钩体），为动物钩体的流行病学监测和调查提供一种比 较理想的方法。方法 根据钩体赖株DNA合成1对flaB引物，用PCR技术对钩体菌株、疫区现场蛙肾材料等进行flaB基因 扩增，用地高辛（DIG）标记flaB 基因探针，用斑点杂交技术进行检测。结果 结果表明用DIG标记的flaB探针可以检测到 5fg及以下的DNA扩增产物。疫区70份蛙肾标本，斑点杂交检测阳性19份，阳性率为27.14%。而钩体细菌分离阳性者只 有8份，阳性率11.43%，PCR扩增阳性者14份，阳性率20.00%。结论 Dot blotting杂交是一种灵敏、特异、快速的钩体检测 方法，可用于两栖类钩体的流行病学监测和调查。 【关键词】斑点核酸杂交；钩端螺旋体；蛙；流行病学 + 中图分类号：R377.5 文献标识码：B ＊ ＊ Epidemiological investigation of frog leptospirosis by dot blotting WANGZhao⁃fen ,JIANGXiu⁃gao,LIXiu⁃wen. Medical CollegeofQinghaiUniversity,Xining,Qinghai810001,China Correspondingauthor:JIANGXiu⁃gao,E⁃mail:xiugaoj@163.com 【Abstract 】 Objective TodetectleptospirainfrogsbyDotblottingandtoestablishapromisingtechniqueusedfor epidemiologicalinvestigationandsurveillanceofleptospirosis.Methods ApairofflaB primerwassynthesizedaccordingtothe sequencesofflaB fromLaistrainof Leptospiraicterohaemorrhagiae,andwasusedtoamplifytheflaB geneofleptospirainfrog specimenscollectedfromleptospirosisepidemicarea,Anhuiprovince. PCRproductswerethenmovedtoNCmembraneand hybridizedwithflaB probelabeledwithdigoxiugenin. Results Theresultsdemonstratedthatonly5fgofpurifiedDNAof leptospiracouldgiveapositivesignalbyDotblotting.Therewere19positivesamplesdetectedbyDotblottingamong70samplesof frogkidneys,andthepositiveratewas27.14%.Eightsampleswerepositivebycultivating,andthepositiveratewas11.43%.A totalof14samplesdetectedbyPCRwerepositive,anditwas20.00%