本土可裂解青枯病菌的噬菌体之分离与应用.pdf

本土可裂解青枯病菌的噬菌體之分離與應用 研究者：洪郁祺 張立君 指導者：鄭秋萍教授 林玟娟老師 摘要 青枯病為重要細菌性植物病害，危害超過 200 種植物，造成全球許多重要經濟作物 極大損失，卻苦無有效防治策略，是國際重大農業問題。本研究旨在研發具病害防治潛 力之生物防治策略。我們從臺灣田間土壤分離可裂解中/高毒力之本土與外來青枯病菌菌 株之噬菌體，依據其裂解青枯病菌之專一性與能力強弱可初步將之區分為 9 類。此外， 若以整體大趨勢來看，屬於高毒力的青枯病菌對這些噬菌體的抗性也較高。藉由瞭解這 些噬菌體之特性、與不同青枯病菌間之交互作用及在國際青枯病防治之應用潛力，期望 未來有助於基礎科學研究與農業生物科技應用之發展。 壹、 背景資料 一、青枯病 (Bacterial wilt) 青枯病係由青枯病菌 (Ralstonia solanacearum) 引起之細菌性維管束病害。病菌源自 土壤，由植物根部天然開口(如側根生長處)或傷口侵入寄主植物根部，並更深入地群聚 於維管束中的木質部 (Vasse et al., 1995) ，細菌經快速大量增殖後，在維管束內產生高量 黏稠之胞外多醣體 (exopolysaccharides) ，阻礙植物體運輸水分的能力，故被感染的植株 雖保持綠色，但在數日內便會快速萎凋而枯死。在罹病的植株之莖部橫切面可見維管束 木質部褐變，並有乳白色黏性菌液溢出。 青枯病菌寄主範圍廣，危害高達二百多種植物，造成罹病植物萎凋死亡，影響全球 農作物產量甚劇 (Hayward, 1991; Denny, 2006) 。本病害最初發生於熱帶及亞熱帶地區， 在此兩區發生也最為嚴重，但現今已擴大到溫帶地區 (Kim et al., 2003) ，且因無有效的 化學防治法，早已成為全球性重要病害，國際各國無不重視之，但卻苦無有效解決之道。 台灣氣候高溫多濕，適合青枯病的發生，中南部尤其普遍，寄主植物包括番茄、煙草、 馬鈴薯、甜椒、茄子、落花生、蘿蔔、天堂鳥花、草莓、紫蘇、蓮霧、釋迦、康富利、 篦麻、胡麻等，在臺灣常見的寄主是茄科類作物，此病害更是全球番茄前五大最重要病 害之一，一直都列於各國番茄抗病育種的首要病害之一（亞洲蔬菜研究開發中心 Peter Hanson 博士提供資訊）。近年來又發現其寄主範圍有擴大的趨勢 (林，2009) ，更顯現出 此病害對臺灣與國際經濟作物作物的危害不容小覷。 二、番茄青枯病菌 (R. solanacearum) 青枯病菌為好氧革蘭氏陰性桿菌，具有極生的長鞭毛。在自然環境中， R. solanacearum 可自病株流入土壤或水中，或在罹病株殘體中存留，抑或可感染其他雜草 但不產生病徵，這些都是青枯病菌造成下一次病害發生的天然感染源 (Hayward, 1991) 。 R. solanacearum 在水中的存活時間視其環境的各種生物及非生物因子，可由數週長至數 年，在 20~25℃下保存於純水中可存活 40 年以上 (Denny, 2006) ；在土壤中本病原細菌 則可殘存 14 個月以上，最長可達 25 年之久 (Elphinstone, 1996) 。 青枯病菌因具有寄主範圍廣、地理分佈廣、基因組歧異度大等特性，被視為是一 Species complex ，可因這些特性之多樣性而利用三種不同的系統區分 (Denny, 2006) ：一 是根據寄主範圍可將其分為五個 races ，二是依據酸化含有不同雙糖、糖醇之培養基的 424 能力之有無而可分為六個 biovars ，而最新的分類系統則是以根據各式DNA 分析技術之 檢測將之分為四個演化群稱為 phylotypes 。phylotype Ⅰ菌株主要分佈在亞洲，主要寄主 為茄科類作物；phylotype II 主要分佈在歐美，主要寄主為馬鈴薯、香蕉、番茄；phylotype III 主要分佈在非洲，主要寄主為番茄；phylotype IV 主要分佈在印尼