肥达试验.ppt

实验六 肠道杆菌 示教： 主要肠道杆菌，大肠埃希菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌及变形杆菌的形态、染色性 主要肠道杆菌，大肠埃希菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌及变形杆菌的培养特性 主要肠道杆菌，大肠埃希菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌及变形杆菌的生化反应 操作： 肥达反应 粪便肠道致病菌的分离和鉴定 SS平板 分离肠道病原菌的强选择培养基 成分： 基础培养基、乳糖、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、枸橼酸铁、胆盐、煌绿、中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄） 作用： 乳糖，中性红：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄色；大肠埃希菌分解乳糖产酸，菌落呈红色 胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌如E.coli的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱，可以增加标本的接种量，以获得对肠道病原菌较高的阳性分离率 病原菌:小,无色,透明 非致病菌:大,红色 双糖管 接种方法 观察 上层含乳糖部分 发酵乳糖 致病菌红色，非致病菌黄色； H2S试验 然后观察下层 发酵葡萄糖（产酸产气）及动力 * 肥达试验 原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原，以及甲型伤寒沙门菌和肖氏沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清作定量凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。 用途：辅助诊断伤寒，副伤寒 生理盐水 1:1280 1:640 1:320 1:160 1:80 1:40 1:20 0.2ml 0.2ml 副乙H 0.2ml 0.2ml 副甲H 0.2ml 0.2ml 伤寒H 0.2ml 0.2ml 伤寒O 8 7 6 5 4 3 2 1 微量板 Ag 测 Ab 已知 未知 滴度 病人1：10血清 血清1：20 0.2ml×4 第一列小孔 0.8 ml 吸管吹打3次 1.6ml 生理盐水0.8 ml 混匀 0.8ml 混匀 1：40 0.2ml×4 第二列小孔 生理盐水0.8 ml 0.8ml 混匀 …… 生理盐水0.8 ml 1：80 …… Ag加样方向 1.稀释Ab 2.加Ag 3.45℃孵育30’ 4.结果观察 粪便标本肠道致病菌分离鉴别流程 标本 选择鉴别培养基 (SS平板) 生化反应 血清学鉴定 双糖管等 已知Ab检测未知Ag (玻片凝集试验) SS 平板挑取可疑菌落2个 (无色,透明,小) 接种双糖管 培养,观察 37℃ 24h EMB平板 病原菌:透明,无色 非致病菌:紫黑色 乳糖,Fe2+ 固体 葡萄糖 半固体 指示剂:酚红 *