用PCR 结合甲基化特异 PCR 方法检测遗传性脆性 X 综合征.PDFVIP

·748 · 安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2010 Dec ;45 (6) PCR PCR X 用 结合甲基化特异 方法检测遗传性脆性 综合征 1，2 2 1 ， ， 郝穹予 陈 英 范礼斌 、 、 摘要 目的 建立一种快速 灵敏 廉价的实验室检测脆性 化情况可对FXS 进行基因分型。 X (FXS) 。 130 (CGG)n 综合征 的方法 方法 检测 例样本的 。 ，PCR X (FMR ) 1 材料与方法 重复数 首先 扩增脆性 智力低下基因 Ⅰ Ⅰ (CGG)n ; ， PCR (MS- 的 重复序列 其次 进行甲基化特异性 1． 1 样本来源和试剂 样本来自北京市儿童医院 PCR)， DNA 对男性不能有效扩增和女性样本的基因组 进行 门诊疑似FXS 和孤独症患儿的肝素抗凝外周血。 ， DNA ， 亚硫酸氢钠脱氨基修饰 以修饰后的 为模板 用两套不 ( Pfu 、Taq DNA 聚合酶购自三博远志公司;2 × GC 同的引物对 甲基化特异性引物对和非甲基化特异性引物 ) FMR (CGG)n ，PCR buffer Ⅱ购自TaKaRa 公司;EcoR Ⅰ限制性内切酶购 对 扩增 Ⅰ基因的 重复序列区 产物测 Fermentas ; Sigma ; 。 (CGG)n 13 ～ 47 ; 自 公司 亚硫酸氢钠购自 公司 片 序 结果 所有样本的 重复数都在 之间 FMR C T 测序结果表明 Ⅰ基因中的非甲基化的 碱基转变为 ; 段纯化回收试剂盒购自中科瑞泰公司 其它试剂均 ， C 。 PCR MS-PCR 碱基 甲基化的 碱基保持不变 结论 结合 为国产分析纯。 方法可以同时检测FMR Ⅰ基因的 (CGG)n 重复数和CpG 岛 1． 2 方法 ， FXS 。 的甲基化情况 为临床检测 提供了依据 1． 2 ． 1 引物设计与合成 根据美国生物技术信息 X 主题词 脆性 综合征