酵母RNA分离和组分鉴定.docVIP

酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 目的： 1.掌握稀碱（NaOH）法分离酵母RNA的原理与方法 2.了解RNA的组分并掌握定性鉴定的具体方法。 二、原理：酵母核酸中RNA含量较多。RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀，是用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA。提取的RNA有不同程度的降解。由此即得到RNA的粗制品。 三、器材 　　 四、试剂和材料　　 将2mL 10％三氯化铁溶液（用FeCl3·6H2O配制）加入 到400 mL浓盐酸中。 9．苔黑酚乙醇溶液 10 mL ：溶解6g苔黑酚于100 mL 95％乙醇中（可在冰箱中保存1个月）。 10．酵母粉 200 g 11.地衣酚（3,5—二羟甲苯试剂）：取比重1.19HCl 100ml，加入FeCl3·6H20 100mg及二羟甲苯100mg，混匀溶解后，置于棕色瓶中，此试剂必须在临用前新鲜配制。 五、操作 1.将15g酵母悬浮于90 mL 0.04 mol／L氢氧化钠溶液 中，并在乳钵中研磨均匀。将悬浮液转移至150毫升锥形瓶 中。在沸水浴上加热30分钟后，冷却。离心（3000 r／min）15分钟，将上清液缓缓倾入30 mL酸性乙醇溶液中。注意要一边搅拌一边缓缓倾入。待核糖核酸沉淀完全后，离心（3000 r／min）3分钟。弃去清液。用95％乙醇洗涤沉淀两次，乙醚洗涤沉淀一次后，再用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗中抽滤。沉淀可在空气中干燥。 2.核糖的鉴定：取试管两只，分别标明测定管与对照管，然后依次加入下列各试剂。 管 号 RNA水解液 5％H2SO4 3，5-二羟甲苯 测定管 4滴 不加 6滴 对照管 不加 4滴 6滴 将两试管放入沸水浴内加热10分钟，比较两管之颜色。 实验结果 测定管由黄色变成绿色为阳性反应，对照管没有明显颜色反应。 注意事项 1.样品倒入玻璃离心管不能太满； 2.离心前玻璃离心管（套上塑料管套）放在天平上平衡好；