组培实验讲义2.docVIP

实验二、培养基贮备液（母液）的配制 实验目的：熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法. 实验原理：培养基中提供植物生长所需的营养成分，才能满足植物正常的生长发育需要。主要包括水分、无机盐、而配制母液时将其分为大量、微量、铁盐、有机分别配制。配制培养基时为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后准确称量分别先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用时按此母液稀释配制即可。 实验材料、试剂和仪器设备 1、试剂：各种试剂见实验内容；蒸馏水 2、仪器设备：分析天平、烧杯（100ml、200ml、1000ml）、量筒（10ml、50ml、100ml）、容量瓶（200ml、500ml、1000ml）、移液管、枪及枪头、试剂瓶、玻璃棒、称量纸 实验内容：称量药品分别配制大量元素母液1000mL;、微量元素母液1000mL、铁盐母液1000mL、有机母液1000mL 一，MS培养基的组成 1、大量成分→ 20×的母液贮备液 贮备液I mg/L 20× 实际称取量（g） NH4NO3 1650 33000 33g KNO3 1900 38000 38g CaCl2 2H2O 440 8800 8.8g MgSO4 7H2O 370 7400 7.4g KH2PO4 170 3400 3.4g 配制20倍浓度贮备液1000mL.每配制1L的培养基吸取50ml母液 实际秤取量=使用浓度× 倍数×配制体积 母液吸取量=需配制培养基体积÷母液浓缩的倍数 2、微量成分→200×的母液贮备液 贮备液II mg/L 200× 实际称取量（g） KI 0.83 166 0.16 g H3BO3 6.2 1240 1.24 g MnSO4 4H2O 22.3 4460 4.46 g ZnSO4 7H2O 8.6 1720 1.72 g Na2MoO4 2H2O 0.25 50 0.05 g CuSO4 5H2O 0.025 5 0.005 g CoCl2 6H2O 0.025 5 0.005 g 配制200倍浓度贮备液1000mL.每配制1L的培养基吸取5ml母液 3、铁盐 100×的母液贮备液 贮备液III mg/L 100× 实际称取量（g） FeSO4 7H2O 27.8 2780 2.78 g Na2 EDTA 2H2O 37.3 3730 3.73 g 配制100倍浓度贮备液1000mL.每配制1L的培养基吸取10ml母液 4、有机成分 200×的母液贮备液 贮备液IV mg/L 100× 实际称取量（g） 肌醇 100 10000 10 g 烟酸 0.5 50 0.05g 盐酸硫胺素(VB1) 0.1 10 0.1g 盐酸吡哆醇 0.5 50 0.05g 甘氨酸 2 200 0.2g 配制100倍浓度贮备液1000mL.每配制1L的培养基吸取10ml母液 二、具体步骤： 1、大量元素的母液配制： 按上述要求按实际称取量称取大量元素，分别用少量蒸馏水、将5种大量元素分别溶解于5个烧杯中，待每种药品充分溶解后，混合、容量瓶定容至1L，贴上标签放入冰箱保存。 2、微量元素的母液配制： 按上述要求按实际称取量称取微量元素，分别用少量水、将7种微量元素分别溶解于