HPLC法测定云南松松针中莽草酸含量.docVIP

HPLC法测定云南松松针中莽草酸含量[摘要]目的：建立高效液相色谱法测定云南松松针中莽草酸的含量方法。方法：色谱柱为Agilent EcBpae XDB-C18(4.6mm×150mm，51μm)，流动相为甲醇-1％磷酸水溶液(3：97)，流速0.8mlmin-1，检测波长214nm，柱温25℃。结果：莽草酸在0.0312-0.4368ug范围内与峰面积呈良好的线性关系(r＝0.9999)，平均加样回收率为99.97％，RSD为1.06％(n＝6)。结论：此方法准确、简便，适用于云南松松针中莽草酸的定量分析。 [关键词]云南松松针；莽草酸；高效液相色谱法 [中图分类号]R286.0　[文献标识码]A　[文章编号]1007-8517(2011)09-0038-02 松针(pine needle)又名松叶，为松科松属(Pinus)植物马尾松、华山松、黄山松、黑松、油松、云南松、红松等的针叶，俗称松毛、山松须、猪鬃松叶等。《本草纲目》曰：“久服令人不老，轻身益气，主治风湿疮，生毛发，安五脏，守中，不饥延年。”针叶具有活血、祛风，燥湿止痒之功，可用于治疗风湿疥癣等疾病。现代药理学研究证明，莽草酸具有较强的抗炎、镇痛和抑制血小板聚集作用，也是目前临床上唯一对感染禽流感病毒患者有效药物“达菲”的基本原料。目前有关莽草酸的化学合成，由于反应条件苛刻、成本高而难于满足市场需求，因此筛选价廉的莽草酸提取原料显得十分迫切。我国云南松资源丰富，为了寻找该植物中的活性成分，综合利用其资源，使其变废为宝，本实验采用HPLC法测定云南松松针中莽草酸的含量，为有针对性的开发利用我国各地丰富的云南松资源中莽草酸提供科学依据。 1、仪器与试药 Agilent1200型高效液相色谱仪(包括四元泵，自动进样器，DAD检测器，chemstation化学工作站)；SY3200-7型超声波清洗器(上海声源超声仪器设备有限公司)；AE240电子天枰(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)。 莽草酸对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，HPIC测定，归一化法计算其纯度≥99％，批号AO112)。甲醇为色谱纯(美国Tedia公司)，水为娃哈哈牌纯净水，其它均为国产分析纯试剂。 云南松样品为2010年2月采集于云南省大理市漾濞县，经马晓匡教授鉴定为云南松(pinus yunnanensisFraneh)。 2、色谱条件 色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(4.6mm×150mm，5pan)，流动相为甲醇-1％磷酸水溶液(3：97)，流速为0.8mlmin-1，检测波长为214nm，柱温为25℃。 3、系统适用性实验 3.1理论塔板数(n) 按莽草酸峰计算为7766.428，不低于5000。 3.2分离度与其它峰的分离度为2.1，均大于1.5；对照品溶液和供试品溶液分别进样10μl，记录色谱图，莽草酸的保留时间约为2.8min，见图1。 4、分析方法认证与结果 4.1溶液的制备 4.1.1对照品溶液的制备 精密称取莽草酸对照品0.0078g(7.8mg)，置于100ml容量瓶中，加重蒸水溶解并定容至刻度，摇匀，即得对照品贮备液(每1ml含莽草酸78ug)。 4.1.2供试品溶液的制备精密称取云南松松针0.1003g，置于100ml具塞锥形瓶中，加重蒸水60ml，超声处理(功率200W，频率33kHz)90min，过滤，定容至100ml，临用前用0.45μm微孔滤膜过滤并装入进样瓶中，得云南松松针供试品溶液。 4.2标准曲线的制备精密吸取莽草酸对照品贮备液1，2，4，6，8，10，12，14ml，分别置于25ml容量瓶中并定容，浓度分别为3.12ug/ml，6.24ug/ml，12.48ug/ml，18.72ug/ml，24.96ug/ml，31.20ug/ml，37.44ug/ml，43.68ug/ml，摇匀，用0.45um微孔滤膜过滤并分别装入进样瓶中备用。分别精密吸取10ul注入色谱仪，得进样量c(ug)与峰面积A的线性方程。结果表明，莽草酸进样量在0.0312-0.4368ug与峰面积成良好的线性关系，回归方程为A＝5042.6C＋28，2490，r＝0.9999(n＝8)。 4.3重复性试验精取莽草酸对照品溶液(31.20ug/m1)10ul，重复进样5次，测得色谱峰峰面积平均值为1602.0859，RSD为0.037％，符合分析要求。 4.4精密度试验精密称取同一批云南松松针干燥粉末6份，按样品测定法重复测定6次，测得莽草酸含量的平均值为1.34％，RSD为3.04％，符合分析要求。 4.5稳定性试验取云南松松针供试品