外源性CO对MPTP所致小鼠多巴胺能神经元损伤保护作用.docVIP

外源性CO对MPTP所致小鼠多巴胺能神经元损伤保护作用【摘要】 目的 探讨吸入低浓度外源性一氧化碳(Carbon monoxide CO)对帕金森模型鼠黑质多巴胺神经元的保护作用。方法 24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组8只，模型组8只，一氧化碳吸入组8只。小鼠皮下注射1-甲基-4-苯基1，2，3，6四氢吡啶(MPTP)复制帕金森病模型，给予吸入外源性低浓度CO干预，利用尼氏染色技术和免疫组化染色技术，观察黑质区神经元形态学和多巴胺神经元数量变化，并进行统计学分析。结果 尼氏染色结果显示：一氧化碳吸入组黑质区神经元胞浆中蓝染斑块状物质较对照组明显减少，但明显多于PD模型组，以PD模型组黑质区神经元胞浆中蓝染斑块状物质减少或脱失最为明显；一氧化碳吸入组TH阳性神经元数目较对照组明显减少(P4 h脱脂，入蒸馏水洗数分钟；0．05％焦油紫醋酸水溶液染色数分钟(镜下观察)，100%酒精1 min,二甲苯透明，封片。 1．2．5 免疫组化染色步骤 行SABC法进行免疫组织化学染色：将中脑切片浸入兔抗TH(1：5 000 Chemcon ),随后依次进入生物素化IgG工作液和SABC三抗工作液(北京中山)，室温下各孵育2 h,辣根过氧化物酶标记的DAB将免疫产物显为棕黄色.在孵育过程中用PBS溶液代替一抗做空白对照，免疫组织化学染色后,将切片裱于多聚赖氨酸处理的载玻片上,梯度乙