比较胰酶-EDTA两种消化液对携带水痘-带疱疹病毒2BS消化效果研究.docVIP

比较胰酶/EDTA两种消化液对携带水痘-带疱疹病毒2BS消化效果研究【摘要】 目的 比较胰酶和EDTA两种消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞冻融后的病毒滴度（VT）。方法 分别配制两种浓度的胰酶和EDTA：0.125%、0.25%的胰酶，0.01%、0.02%的EDTA各1000 ml，按比例加入预先培养好的携带水痘-带疱疹病毒的等量2BS细胞中，消化后，用显微镜观察细胞形态，消化液离心、浓缩、冻融、检测并比较病毒滴度。结果 与0.125%、0.25%的胰酶、0.01%EDTA， 0.25%的胰酶与0.02%的EDTA混合消化液相比，用0.02%的EDTA消化液消化感染水痘-带状疱疹病毒的2BS细胞，冻融后的病毒滴度提高了1.3～0.8个log值。结论 用0.2%EDTA消化液消化的含有水痘病毒的细胞获得的病毒滴度最好。 【关键词】 胰酶;EDTA; 2BS 细胞;病毒滴度 【Abstract】 Objective The analysis of the healing effect two digestive trypsin and EDTA digestion and chickenpox-herpes zoster virus 2BS cells after freezing and thawing of the virus titer（VT）. Methods The preparation of two concentrations of trypsin and EDTA: 0.125%, 0.25% trypsin, 0.01%, 0.02% EDTA all 1000 ml, added in proportion to carry a good pre-training varicella-zoster virus with the equivalent 2BS cells, digestion, cell morphology was observed with a microscope, centrifuge digestion, concentration, freeze-thaw, test and compare the virus titers.Results And 0.125%, 0.25% trypsin, 0.01% EDTA, 0.25% trypsin and 0.02% EDTA mixture of digestive juice, compared with 0.02% EDTA digestion digestive infection of varicella-zoster virus 2BS cells, the virus titer after freezing and thawing increased 1.3～0.8 a log value.Conclusion Digestion with 0.2% EDTA digestion of cells containing varicella virus titer obtained by the best. 【Key words】 Trypsin, EDTA; 2BS cells; Virus titers 水痘疫苗作为预防水痘-带状疱疹病毒的唯一有效制剂已问世多年，主要用2BS细胞培养病毒并制备疫苗，疫苗的制备工艺也以2BS细胞的转瓶培养代替其细胞的静止培养［1］，生产工艺中细胞消化是工艺必不可少的步骤，直接影响疫苗的质量，是生产工艺的关键点，以往没有文献报道，细胞消化一般采用胰酶和EDTA［2］，本研究主要以不同浓度的胰酶和EDTA消化细胞，冻融后通过细胞形态和病毒滴度检测，对疫苗的质量进行比较，该研究为生产高质量疫苗提供试验依据。两者虽然都是从培养皿上消化细胞，但取得的结果不同。作者主要是总结比较，通过不同消化液的消化方式，哪种方式获得的细胞利于冻融，不影响细胞内病毒存活，生产时获得高滴度疫苗。 1 材料与方法 1.1 材料及仪器设备 2BS细胞（人胚肺二倍体细胞由国家药品当局批准的二倍体细胞2BS） 1.2 胰酶（trypsin美国Becton,Dickinson and company） 1.3 EDTA（Ethylenediamine tetraacetic acid disodium salt国药集团化学试剂有限公司） 1.4 显微镜（型号XDS-1B厂家：重庆光学仪器厂） 1.5 转瓶机（型号GD/T76厂家：长城仪器设备厂） 1.6 细胞培养液：细胞培养液为含10%灭活小牛血清的Eagle’sMEM液，PH为7.2～7.3。