akt1基因沉默降低小鼠乳腺癌细胞的肺转移能力.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（３）：１４～１９ Ａｋｔ１基因沉默降低小鼠乳腺癌细胞的肺转移能力 刘海艳　顾玉超　宓文义　于文功 （中国海洋大学医药学院　青岛　２６６００３） 摘要　Ａｋｔ１是一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，参与调节细胞的代谢、生长和发育。作为一种原癌 基因，Ａｋｔ１在许多人类肿瘤中表达显著增高，促进肿瘤转移；但也有研究表明，Ａｋｔ１的活化可抑制 乳腺癌细胞的侵袭和转移。为了深入探讨Ａｋｔ１在肿瘤发生发展过程中的作用，采用ＲＮＡ干扰技 术沉默了高转移小鼠乳腺癌细胞４Ｔ１中Ａｋｔ１的表达。ＭＴＴ法检测发现，Ａｋｔ１沉默不影响４Ｔ１细 胞的增殖能力；Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ法检测证明，Ａｋｔ１沉默可降低４Ｔ１细胞的迁移能力。与以上结果相一 致，Ａｋｔ１沉默不影响乳腺癌形成原位瘤的能力，但显著降低其体内肺转移能力。结果表明，Ａｋｔ１ 在小鼠乳腺癌细胞转移过程中发挥重要作用，并提示Ａｋｔ１可能成为乳腺癌治疗的靶点。 关键词　Ａｋｔ１　乳腺癌　细胞迁移　肿瘤转移 中图分类号　Ｑ８１９ 　　Ａｋｔ是一种丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，可通过磷脂 维细胞的侵袭能力［３，８～９］，但可抑制 ＭＤＡＭＢ２３１细胞 酰肌醇３激酶（ＰＩ３Ｋ）依赖的机制被胞外信号激活。目 ［１０］ 的迁移能力 。在乳腺癌中也发现Ａｋｔ１异常表达和 前发现 Ａｋｔ有三个家族成员 Ａｋｔｌ／ＰＫＢ、Ａｋｔ２／ＰＫＢ、 α β 活性改变，并在乳腺癌的转移过程中发挥重要的作用。 Ａｋｔ３／ＰＫＢ。它们的氨基端含有１个血小板－白细胞ｃ ［１１］ γ 降低Ａｋｔ１水平抑制ＥｒｂＢ２介导的乳腺癌体内转移 ； 激酶底物同源结构区域（ｐｌｅｃｋｓｔｒｉｎｈｏｍｏｌｏｇｙ，ＰＨ），可介 而过表达ｍｙｒＡｋｔ１可抑制人乳腺癌细胞的迁移和侵袭 导脂质—蛋白质和（或）蛋白质—蛋白质之间的相互作 ［１２］ 能力 。Ａｋｔ１活化还可促进 ＥｒｂＢ２介导的乳腺肿瘤 用。Ａｋｔ通过ＰＨ区特异性与ＰＩ３Ｋ的类脂产物磷酯酰 ［６］ 发生但抑制其侵袭能力 。这些结果表明，Ａｋｔ１在不 肌醇３，４，５三磷酸［ＰＩ（３，４，５）Ｐ３］结合募集到细胞膜 同的细胞型或肿瘤的不同发展阶段所起的作用也 上，并通过上游磷脂酰肌醇依赖性激酶 １，２（ＰＤＫ１、 不同。 ＰＤＫ２）磷酸化进入活化状态。激活的Ａｋｔ重新定位到 　　为了进一步研究Ａｋｔ１对肿瘤发生发展的影响，本 胞质、核内或细胞内的其他部位，磷酸化大量的底物蛋 文采用ＲＮＡ干扰技术建立了Ａｋｔ１稳定沉默细胞模型， ［１］ 白，最终调节细胞的增殖、分化、存活和迁移等 。 并通过体外和体内实验研究了Ａｋｔ１在乳腺癌生长和转 　　恶性肿瘤细胞通过复杂的信号通路获得攻击性行 移过程中的作用。 为，这些信号通路参与调节细胞的生长、存活、迁移、侵 １　材料与方法 袭等重要功能。ＰＩ３Ｋ／Ａｋｔ信号通路与上述功能密切相 关，所以该通路中的一个或多个信号组分失调常常会 １．１　细胞与培养基 导致疾病的发生［２］。近年来研究发现，Ａｋｔ１不但影响 　　小鼠乳腺癌细胞株４Ｔ１为美国ＫａｒｍａｎｏｓＣａｎｃｅｒ 肿瘤细胞的增殖、凋亡，而且对许多肿瘤的侵袭和转移 Ｉｎｓｉｔｕｔｅ的ＦｒｅｄＲ．Ｍｉｌ