添加谷胱甘肽改良低钾右旋糖酐液对离体肺保护实验探究.docVIP

添加谷胱甘肽改良低钾右旋糖酐液对离体肺保护实验探究宋晓春　刘志勇　王洪斌　胡定辉 [摘要]目的对比研究添加谷胱甘肽的改良低钾右旋糖酐液(LPDG液)和低钾右旋糖酐液(LPD液)对离体肺的保护作用。方法健康杂种家兔18只，建立离体肺再灌注模型。随机分为正常对照组(n=6)、LPD液保护组(n=6)和LP-DG液保护组(n：6)。正常对照组供肺取出后直接离体灌注2h，另外两组供肺分别以4度LPD液和LPDG液灌洗后保存8h，再循环灌注2h。灌注期间每隔1h分别测定流入离体肺的静脉血及流出离体肺的动脉血的氧分压(PO2)和二氧化碳分压(PCO2)；测定丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(sOD)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素一8(IL-8)含量并计算肺湿干重比(W／D)。结果再灌注1h和2h后，LPDG液保护组流出血P02均值显著高于LPD液保护组(均P0.05)。再灌注1h后，LPDG组流出血PO2均值显著高于LPD组(P0.05)；LPDG组流出血PCO2均值显著低于LPD组(P0.05)。再灌注2h后，LPDG组流出血PO2均值显著高于LPD组(p0.05)。LPDG组SOD活性均值较LPD组明显升高(P0.05)。 3　讨论 为了提高离体肺保存质量，许多学者对肺保护液成分进行了大量研究，在肺保护液中添加一些活性成分已成为改进肺保护的重要方法之一。缺血再灌注(IfR)损伤已成为肺移植患者术后死亡的主要原因，而自由基的毒性作用是缺血再灌注损伤发生的一个重要机制。 谷胱甘肽(GSH)是机体内自由基防御系统中的一个重要物质。它是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸组成的组均值比较差异无统计学意义(P0.05)；LPDG组流出血PCO2均值显著低于LPD组(P0.05)。 2．2　再灌注2h后TNF-a、IL-8、SOD、MDA含量和肺W／D测定 表3显示，LPDG组W／D均值明显低于LPD组(P0.05)，高于对照组(P0.05)。LPDG组MDA具有重要生理功能的活性三肽，是细胞内呈液态、含巯基最为丰富的一类化合物。巯基是其主要功能基团，具有还原性，一方面通过酶反应直接或间接有效地清除自由基和其他活性氧(如羟基、脂性自由基和H2O2等)，另一方面可与毒物分子及其代谢物发生结合反应降低其毒性，使含巯基酶和蛋白质处于活性状态。GSH可清除许多自由基，减轻自由基对组织和细胞的损伤；同时它可以在过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶协同作用下，清除体内的过氧化氢、过氧化脂质和二硫化物，抵御细胞脂质的过氧化损伤，终止连锁反应。故其在细胞抗氧化损伤中起着极为重要的作用。 虽然许多研究表明，LPD液对离体肺的保护作用优于EC液和UW液，但是根据Belzer等提出实质性器官低温保存时应防止氧自由基对细胞膜损伤的原则，LPD液仍有不足之处。GSH可以清除自由基和过氧化氢，减轻缺血再灌注损伤，因此，把GSH添加到LPD液中配制成改良LPD液(LPDG液)，能够提高离体肺保存质量。 肺缺血再灌注损伤的基本病理改变为肺毛细血管内皮受损，通透性增高。肺W／D可反映肺水含量。我们实验结果显示，LPDG组W／D明显低于LPD组，说明LPDG组肺组织水肿程度较LPD组低，可能与GSH清除了氧自由基，减轻了对肺毛细血管内皮的损伤有关。SOD是体内重要的抗氧化酶，能及时清除体内产生的氧自由基，阻断由超氧阴离子O2所激发的一系列自由基反应，其活性高低可反映机体抗氧化损伤能力。MDA是过氧化脂质降解产物，其含量高低可反映机体内脂质过氧化程度。LPDG组肺组织MDA含量较LPD组显著降低，SOD活性较LPD组明显增高，表明LPDG液显著提高了离体肺抗氧化损伤的防卫能力，可能与GSH减轻了氧自由基对细胞膜不饱和脂肪酸的氧化、降低了内源性抗氧化系统的大量消耗有关。 细胞因子是肺缺血再灌注损伤发生发展的间接反应指标，对评价移植肺功能具有重要意义。TNF-α是炎症反应早期最具影响的细胞因子之一，它既可直接损伤肺毛细血管内皮细胞，又可诱导其他细胞因子的产生和释放，并与其他细胞因子相互作用引起肺组织损伤。IL-8是一种强有力的中性粒细胞趋化及激活因子，特异性地出现在炎症部位，通过趋化作用在炎症部位招募各种白细胞，并促进中性粒细胞脱颗粒，产生氧自由基、蛋白酶等介质，直接损伤肺组织细胞，其水平高低和移植肺早期肺功能密切相关。使用TNF-d或IL-8抑制剂，可减轻移植肺缺血再灌注损伤，改善肺功能。LPDG组TNF-a和IL-8水平明显低于LPD组，说明了LPDG组肺组织炎症反应较轻，可能有以下两方面原因：(1)GSH清除了氧自由基，减少了对中性粒细胞的激活，进而减少中性粒细胞释放TNF-α和IL-8；(2)GSH抑制了TNF-a、IL-8等炎症细胞因