花松萝体外抑菌活性实验探究.docVIP

花松萝体外抑菌活性实验探究摘 要 为探讨花松萝不同溶剂提取物的抑菌作用，采用打孔琼脂扩散法和稀释法对花松萝不同溶剂提取物进行抑菌实验研究。结果表明花松萝的不同溶剂提取物对供试细菌和真菌（金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、藤黄微球菌、绿脓杆菌、黄霉菌）均有一定程度的抑制效果，而对粪链球菌没有抑制作用，为花松萝抑菌活性的进一步研究提供依据。? 关键词 花松萝 抑菌 最小抑菌浓度 抑菌圈?? 松萝为松萝科松萝属植物节松萝Usnea diffracta Vain.、长松萝U.longissima Ach.和花松萝Usnea florida(L.)Wigg。以地衣体入药。全年可采，晒干备用。具有清热解毒、止咳化痰的功效，常用于肺结核（多用松萝酸的钠盐）、慢性支气管炎；松萝还用于治创伤感染、术后刀口感染、化脓性中耳炎、疮疖、淋巴结结核以及乳腺炎等［1］。? 松萝广泛分布于西南、东北等地。含巴尔巴地衣酸、松萝酸、地弗地衣酸，拉马酸、地衣聚糖，原冰岛苔酸等［2］［3］，松萝中的有效成分松萝酸具有较强的抑菌活性，松萝酸的抗菌谱主要为革兰氏阳性细菌及结核杆菌。在试管中，松萝酸对肺炎球菌、溶血性链球菌、白喉杆菌、结核杆菌都有很强的抑菌作用，抑菌浓度为1~5μg/ml，50μg/ml可以完全抑制细菌的生长。但也有文献记载，对革兰氏阴性的百日咳杆菌、枯草杆菌、肺炎杆菌、大肠杆菌、变形杆菌有效，而对痢疾杆菌、伤寒杆菌无效［4］。? 本研究首次对花松萝不同溶剂提取物的抑制细菌和真菌的活性进行了研究，阐明其植物的抗菌特性，为花松萝的进一步开发利用提供基础。? 1 材料与方法? 1.1 材料与仪器? 材料：花松萝购于贵州省药材公司，经鉴定为松萝科松萝属植物花松萝? 试剂：石油醚，乙酸乙酯，甲醇，乙醇，95%乙醇，二甲基甲酰胺，均为分析纯，购于贵阳中兴化学试剂公司。? 菌种：购自中国微生物菌种保藏中心，金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）;大肠杆菌（Escherichia coli）;粪链球菌（Enterococcus faecalis）；黄霉菌（Aspergillus flavus）;绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）;藤黄微球菌（Micrococcus luteus ）。培养基：MRS固体培养基：酪蛋白胨10g，牛肉提取物10g，酵母提取物5g，葡萄糖5g，乙酸钠5g，柠檬酸二铵2.0g，Tween80 1.0g，磷酸氢二钾2.0g，MnSO?4H?2O 0.2g，MgSO?47H?2O 0.05g，CaCO?3 20.0g，琼脂15g，定容至?1 000?ml，pH值 调至6.8；营养肉汤固体培养基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂15g，定容至?1 000?ml，pH值调至7.0；查氏固体培养基：硝酸钠3g，磷酸氢二钾1.0g，MnSO?4H?2O 0.05g，蔗糖30g，琼脂15g，液体培养基组成除了不加琼脂外，与相应的固体培养基相同。? 仪器：高低温恒温培养箱（上海一恒科技有限公司），旋转蒸发仪（BUCHIR-200），SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限公司），电子天平（OHAUS）净化工作台（上海市纯昱科学仪器有限公司），真空冷冻干燥机（LABCONCO），超低温冰箱（Forma Scientific），双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限公司TU-1901）。? 1.2 实验方法? 1.2.1 花松萝不同溶剂提取物的制备方法? 将干燥的花松萝粉碎过40目筛，称取等量的花松萝3份，每份150g，分别置于?1 000?ml的水、酒精、乙酸乙脂中。每种溶剂浸泡3次，每次置于恒温（37℃）摇床上（200r/min）震荡12小时，抽滤得到提取液。水的提取液-80℃ 冷冻过夜后用真空冷冻干燥机干燥；酒精提取液40℃减压旋转浓缩除去酒精，-80℃冷冻过夜后用真空冷冻干燥机干燥；酒精提取液40℃减压旋转浓缩除去酒精，-80℃冷冻过夜后用真空冷冻干燥机干燥；乙酸乙酯提取液先减压浓缩除去乙酸乙酯，得浸膏。? 1.2.2 对各部分粗提物的抑菌活性检测? 1.2.2.1 菌种培养? 金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）、藤黄微球菌（Micrococcus luteus）采用营养肉汤培养基（组成成分见上）活化培养，粪链球菌（Enterococcus faecalis）采用MRS培养基（组成成分见上）活化培养，黄霉菌（Aspergillus flavus）采用查氏培养基（组成