苯酚-硫酸法测定菊苣根中总糖含量.docVIP

苯酚-硫酸法测定菊苣根中总糖含量【摘要】目的：研究菊苣根总糖的测定方法。方法：采用苯酚-硫酸法，在488nm处测菊苣根中总糖的含量。结果：回归方程为Y=10.908X-0.13264，r=0.9999，线性范围为30-80μg/ml。平均回收率为103.27%，RSD=2.20%。菊苣根中平均总糖含量为平均含量为34.613mg/g。结论：方法简便，结果准确，为菊苣根总糖的进一步研究奠定良好的基础。 【关键词】：菊苣根 总糖 苯酚-硫酸法 【中图分类号】R28;R92; 【文献标识码】B【文章编号】1007-8517(2008)4-0012-02 菊苣根为菊科植物毛菊苣(CichoriumglandulosumBoiss.etIIout )及菊苣(CichoriumintybusL.)干燥的根。菊苣系维吾尔族习用药材，维吾尔语名为卡申纳，有清肝利胆#65380;健胃消食#65380;利尿消肿之功效[1]。《中国药典》2000年版一部只收载其地上部分。菊苣根主要含有三萜#65380;倍半萜#65380;有机酸等类成分[2-4]。现代药理研究表明 ，菊苣根具有改善消化器官活动机能#65380;改善心脏功能#65380;保肝降脂#65380;降血糖和抗菌等作用[5]。为了确定菊苣根总糖的含量，本文利用苯酚-硫酸法制得醛糖衍生物，采用分光光度法对菊苣根总糖含量进行测定。 1 仪器与试药 SpectrumLab 54分光光度计(上海棱光技术有限公司)，RE52CS-2旋转薄膜蒸发仪(上海亚荣仪器厂)，KQ-400DBC超声清洗仪(昆山市超生仪器有限公司)，BS110S分析天平(北京，赛多利斯)，DZF-6021型真空干燥箱(上海精宏实验设备厂);其它所用试剂均为分析纯。菊苣根采自新疆乌鲁木齐市南山，经新疆自治区中医医院李永和主任药师鉴定为菊科植物菊苣(CichoriumintybusL.)的干燥根。 2 方法与结果 2.菊苣根总糖的提取：菊苣根干燥，粉碎过20目筛，精密称取药材粉末10g，用石油醚索氏回流提取4h，药渣在50℃减压干燥至干。然后精密称取脱脂后的药渣3g，加蒸馏水100mL，回流提取3次。每次20min，过滤，合并滤液并定容至200 ml，得0.015g/ml的总糖提取液，备用。 2.对照品溶液的制备：精密称取葡萄糖对照品100mg，置100ml量瓶中，蒸馏水定容，配成1mg/ml的对照品溶液，备用。 2.3 供试品溶液的制备：精密量取上述菊苣根总糖提取液1ml于10ml具塞试管中，加入6%苯酚溶液1ml，振摇，迅速加入浓硫酸4ml，混合均匀，蒸馏水定容至刻度，静置10min，冷水迅速冷却至室温，备用。精密量取蒸馏水1ml同样操作，作为空白对照。 2.4 测定波长的确定：取供试品溶液#65380;对照品溶液和空白对照溶液，400-700nm波长扫描，供试品溶液与对照品溶液在488nm处有最大吸收。空白对照无干扰。故确定488nm为测定波长，结果见图1。 2.5 标准曲线的制备：分别精密量取对照品溶液30#65380;40#65380;50#65380;70#65380;80μl于10ml具塞试管中，各加入6%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入浓硫酸4ml，混合均匀，蒸馏水定容至刻度，静置10min，冷水迅速冷却至室温。按分光光度法在488nm处测定吸光度。以吸收度(A)对浓度(C)做线性回归计算，得回归方程：Y=10.908X-0.13264，r=0.9999(n=5)。结果表明在30-80μg/ml范围内线性关系良好。 2.6 精密度实验：精密吸取供试品溶液，连续测定4次，RSD=1.09%，表明仪器精密度良好。 2.7 稳定性实验：精密吸取同一新制备的供试品溶液，每隔10分钟测定一次，连续测定3次。RSD=1.35%，表明样品在30分钟之内稳定。 2.8 重复性实验：精密吸取同一批菊苣根总糖提取液3份，制备供试品溶液，按“供试品溶液的制备”项下处理并测定。结果RSD=1.25%。表明本法有较好的重复性。 2.9 回收率实验：精密吸取已知浓度的菊苣根总糖提取液6份，分别加入高#65380;中#65380;低三种浓度不同的对照品溶液，制备供试品溶液，按“供试品溶液的制备”项下处理并测定。结果平均回收率为103.27%，RSD=2.20%，见表1。 2.10 样品测定：连续测定3批菊苣根总糖提取液样品，平均含量为34.613mg/g，见表2。 3 讨论 6%苯酚溶液易被氧化，实验时应现配现用。制备标准曲线时，葡萄糖浓度不应过高，加入浓硫酸不应过多，否则容易碳化。测定样品时应在30分钟内完成，时间过长，样品的稳定性降低