越婢加术汤对慢性肾小球肾炎动物模型治疗探究.docVIP

越婢加术汤对慢性肾小球肾炎动物模型治疗探究在我国北方是慢性肾小球肾炎疾病发病率较高的地区，近年来，随着人民的物质生活水平的不断提高，慢性肾小球肾炎的发病率占有相当大的比重。迄今为止，尚无十分有效的治疗，因此，研究其发病机制、防治措施具有重要意义。 本实验建立的动物模型可为临床治疗该疾病提供实验室动物实验模型条件。为临床研究新药物提供实验室可靠的理论依据［1］。 1 材料与方法 1.1 实验材料 雄性Wistar大鼠 中国医科大学动物室提供；LUZEXF显微图像分析仪(日本，松下公司)；日立H600透射电镜；恒冷箱切片机(日本) 1.2 实验动物分组 本实验选用雄性Wistar大鼠60只，体重260~300 g，随机分成三组。 空白对照组：20只(`10只用于电镜染色，10只用于电镜观察)；慢性肾小球肾炎模型光镜组：1 0只；慢性肾小球肾炎模型电镜组：10只;越婢加术汤治疗组20只(分别用于电镜和光镜检测)。 1.3 实验方法 1.3.1 慢性肾小球肾炎模型制备［2］ 异种血清法雄性大鼠：福氏完全佐剂1 mg和阳离子化牛血清白蛋白3 mg(CBSA等电点8.6)背部皮下多点注射为予免疫，两周后正式免疫；1、2周给CBSA3 mg，3~4周给CBSA5 mg，分别用pH=70.4，0.01 mol/1BSA稀释至1 ml，1次/d，静脉注入。皮下注射完全福氏佐剂与同种鼠肾组织匀浆液(按1：3混合)0.5 ml，注射一次。 1.3.2 用于光镜检测组动物模型取材 对实验动物用1％戊巴比妥钠(40 ml/kg)腹腔麻醉后开胸，经左心室70滴/min滴入1％肝素钠的生理盐水500 ml，同时剪开右心耳。继用0.1M磷酸盐缓冲液(PBS,pH=7.4)配制的固定液(含4％多聚甲醛)灌流固定。取出实验动物的大脑组织，放入含4％多聚甲醛的固定液中进行后固定大约2 h，之后将实验动物的肾组织切成薄片移入含20％蔗糖的PBS中。在4℃冰箱中存放，至组织薄片沉底，经水包埋，恒冷箱连续横切片，片厚20 μm。 1.3.3 尼氏染色方法 冰冻切片吹干，经PBS漂洗5 min×3次，将切片置入1%甲苯胺蓝溶液中37℃孵育90 min，取出后用蒸馏水冲洗，PBS漂洗5 min×3次，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光镜下观察。 1.3.4 用于透射电镜检测组模型取材 各组大鼠在1％戊巴比妥钠(40 ml/kg)腹腔麻醉下，经左心室灌注含1％肝素钠的生理 盐水300 ml快速冲洗后，用2％多聚甲醛及2.5％戊二醛的0.1 mol磷酸缓冲液250 ml灌流固定，灌流后立即取肾，将组织块置于4℃，2.5％戊二醛中固定24 h，再经1％锇酸固定1 h后，常规脱水，包埋，L.K.B超薄切片，醋酸铀、柠檬酸铅双重染色，日立H600透射电镜观察并拍片。 2 实验结果 2.1 尼氏染色结果 在空白对照组切片中可见肾组织的细胞质呈蓝色，细胞形态正常，细胞数量较多，排列紧密，胞浆内尼氏体丰富；而在慢性肾小球肾炎模型光镜组中可见肾政治受损细胞，细胞数量减少，细胞排列紊乱，细胞形态改变，肿胀或皱缩，细胞坏死崩解，溶解成碎片；在用越婢加术汤对慢性肾小球肾炎动物模型的治疗组织的组织切片中可见肾组织的细胞质呈蓝色，细胞形态比较正常，细胞数量较少，排列较规整，胞浆内可见尼氏体。 2.2 电镜超微结构观察 在空白对照组切片中可见细胞的细胞膜、细胞核及细胞质中的细胞器均为正常；而在慢性肾小球肾炎模型电镜组中可见受损细胞出现明显的损伤性改变：核皱缩，核膜部分溶解消失、线粒体肿胀、嵴紊乱甚至缺失、线粒体出现空泡样变，内质网扩张、粗面内质网脱颗粒；高尔基复合体扩张，突触数量减少、前后膜融合、突触小泡不清或出现聚集；越婢加术汤对慢性肾小球肾炎动物模型的治疗组切片中可见细胞的细胞膜、细胞核及细胞质中的细胞器均比较正常。 2.3 显微图像定量分析 用LuzexF显微图像分析仪测定肾脏单位面积尼氏染色阳性反应物平均灰度值(x±s)；测定肾脏单位面积尼氏染色阳性反应物密度之间比较。结果进行统计学处理。 3 结论 根据尼氏染色和透射电镜结果证明慢性肾小球肾炎模型制备成功。用LuzexF显微图像分析仪半定量分析显示越婢加术汤对慢性肾小球肾炎动物模型的治疗效果明显。该模型的制备不仅为基础医学研究提供了可靠的动物模型，更为药物临床治疗慢性肾小球肾炎提供可靠的实验室依据。该动物模型的建立成功，为新药开展治疗慢性肾小球肾炎提供了良好的实验室基础。越婢加术汤对慢性肾小球肾炎动物模型的治疗效果明显证明在临床实践中应该有良好治疗前景。 参 考 文 献 ［1］ 梁晓俐.病理基础与实验技术.军事医学科技出版社,20