高效液相色谱法测定皮质激素含量.docVIP

高效液相色谱法测定皮质激素含量【摘要】目的：建立高效液相色谱法测定醋酸肤轻松软膏的含量，研究醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五种皮质激素的分离情况。方法：样品经甲醇溶解后，用Diamonsil C18柱分析，结果：五种皮质激素能较好地分离，达到了一种方法可同时分离五种激素的目的。结论：采用高效液相色谱法测定醋酸氟轻松软膏的含量使操作更方便，结果更准确。 【关键词】五种皮质激素；高效液相色谱；含量测定 【中图分类号】R927.1 【文献标识码】A 文章编号：1004-7484（2012）-04-0610-01 醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五种皮质激素软膏为治疗皮肤病的常用药。国内一般采用紫外－可见分光光度法分别测定吸光度，因为有基质干扰，含量偏高，且操作复杂，测定结果重现性差。其他方法收载的醋酸肤轻松软膏含量测定方法均不够理想，本人经过试验，采用高效液相色谱法较好，做了回收率试验，确立样品的含量测定。 1.仪器、试剂及样品 岛津UV-2100型高效液相色谱仪，紫外检测器，检测波长：240nm，柱温：30℃；填料用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Diamonsil C185u200×4.6mm柱；甲醇、乙醚为色谱纯规格；醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五种皮质激素对照品及内标物醋酸地塞米松、炔诺酮均符合规定，内标物甲基睾丸素及黄体酮为中国药品生物制品检定所提供的标准品；供试品均为市售品。 2.分析条件确定 2.1 取醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松五种皮质激素的甲醇溶液（浓度为50ug／ml），进样量为10ul，流速为1.0ml／min，以不同比例的甲醇－水为流动相，考察各自的保留时间，计算容量因子（K）。 通过实验结果，表明分离醋酸肤轻松、醋酸去炎松和醋酸氟氢可的松这三种皮质激素它们适宜的甲醇浓度为60～70%，而分离丙酸倍氯美松及氯氟舒松这两种皮质激素它们适宜的甲醇浓度为75%左右为好，这样它们的容量因子均能在2～8之间。 2.2 有文献报导在反相HPLC分离甾体激素时，在流动相中加少量乙醚作为有机改性剂，可提高化合物的分离灵敏度。实验证明在流动相中加少量乙醚能使醋酸肤轻松、醋酸去炎松及内标物的保留时间提前，峰形尖锐并提高了分离度。 2.3 峰面积与浓度的线性关。精密称取醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松这五种皮质激素的对照品与内标物适量，用甲醇制备对照品溶液、内标溶液与测定溶液，按选定的色谱条件进样10ul，从所得的色谱图，以被测皮质激素对内标物的峰面积比为纵坐标，以相应的浓度为横坐标作校正曲线图谱，均得到能过零点的直线，其数据经直线回归，线性关系及精度较好。 2.3.1 对照品溶液的制备。精密称取醋酸肤轻松、醋酸去炎松、醋酸氟氢可的松、丙酸倍氯美松及氯氟舒松对照品25mg，置200ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。 2.3.2 内标溶液的制备。精密称取内标物炔诺酮10mg、醋酸地塞米松30mg、甲基睾丸素12.5mg、黄体酮15mg各置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。 2.3.3 测定溶液。精密量取5种对照品溶液各1ml、2ml、3ml、4ml、5ml分别置10ml量瓶中，各分别加内标溶液１ml（醋酸肤轻松、醋酸去炎松加炔诺酮内标溶液，醋酸氟氢可的松加醋酸地塞米松内标溶液，丙酸倍氯美松加甲基睾丸素内标溶液，氯氟舒松加黄体酮内标溶液）加甲醇稀释至刻度。 3.回收率测定 称取按处方制得的空白基质5g，精密加对照品溶液10ml，搅匀，加甲醇适量，置80℃水浴中加热2分钟，使软膏熔融，精密加内标溶液5ml，放冷至室温后，用甲醇稀释使成50ml，摇匀，置冰浴中冷却2小时，取出后迅速滤过，量取续滤液20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图。按内标法以峰面积计算，色谱条件同上面所述。根据以上同体积对照品溶液在相同色谱条件下测得的校正因子计算回收率。5种对照品所得回收率分别为101.8%、100.4%、99.89%、101.0%、99.82%。 4.重复性试验 取市售各种软膏，精密称取约相当于皮质激系1.25mg，置50ml量瓶中，加甲醇约30ml，置80℃水浴中加热2分钟，操作及色谱条件同上。平行操作5份样品，RSD值为1.2%。 5.样品的含量测定 样品操作及测定方法同重复性试验，另按照提取法测定样品。其结果分别为：醋酸肤轻松：HPLC法：95.37%，提取法101.65%；醋酸去炎松：HPLC法：96.00%，提取法97.10%；醋酸氟氢可的松：HPLC法：99.6