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高效液相色谱法测定蛋糕中栀子黄【摘要】 栀子甙是栀子黄的主要成分,因此以栀子甙为对照品,蛋糕中栀子黄经提取净化后,作为供试品,用高效液相色谱法测定,以保留时间定性,峰面积定量进行含量测定。 【关键词】高效液相色谱法;栀子黄;栀子甙 Determination limit of gardenia yellow in cake by HPLC CHEN Yan-hua,YU Zhong-jun.Si ping Institute Food and Drug Control,Jilin 36000,China 136000,China 【Abstract】 Gardenia yellow Gardenia glucoside is the main component,and therefore Geniposide as the reference substance,gardenia yellow cake purified by extraction,as for the test materials,high-performance liquid chromatography in order to retain time for qualitative,peak area for quantitative determination. 【Key words】HPLC; Gdenia yellow; Gdenia glycosides 栀子黄作为食品着色剂已经列入GB 2760-1996食品添加剂使用卫生标准,最大使用量每千克不得超过0.3 g,含量微小,故我们采用高效液相色谱法测量[1-6],本方法精密度高,重现性好,灵敏,快速、准确且成本低可广泛使用。 1 实验仪器与试剂 1.1 仪器 岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪,高效液相色谱系统:Waters M501泵,U6K进样器,岛津RF-535。配备全波长紫外检测器;小型粉碎机(FW100型 北京中兴伟业仪器有限公司生产),电热恒温水浴(HH#8226; S型 江苏省红旗医疗器械厂生产)高效液相色谱操作条件色谱柱:Agilent HC-C18 5 μ 4.6×250 mm;柱温30 ℃,紫外检测器检测波长:240 nm;流动相:甲醇:水(35?∶?65);流速:0.8 ml/min试剂:甲醇,石油醚(60~90℃),乙酸乙酯,三氯甲烷,以上试剂均为沈阳试剂五厂分析纯栀子甙(来源:中国药品生物制品检定所 批号:110749-200511)。 2 实验步骤 2.1 标准溶液的配制 精密称取13.25 mg栀子甙标准品置50 ml容量瓶中,用甲醇溶解,并用甲醇稀释至刻度。过滤,精密量取5 ml滤液,置25 ml容量瓶中,即得27.5 μg/ml的栀子甙标准品。 分别吸取栀子甙标准溶液0,1.0,2.0,3.0,4.0 ml于10 ml容量瓶中,加甲醇定容至10 ml,即得0,2.25,5.5,8.25,11.0 μg/ml的栀子甙系列标准溶液。 2.2 供试品的配制 精密称取21.0012 g无水蛋糕,放入250 ml的圆底烧瓶中,用100 ml石油醚加热回流30 min,放冷至室温。砂芯漏斗过滤,用石油醚洗涤残渣5次,洗液并入滤液中,减压浓缩石油醚提取液,残渣放入通风橱至无石油醚味。用甲醇提取3~5次,每次30 ml,直至提取液无栀子黄颜色,用砂芯漏斗过滤,滤液通过微孔滤膜过滤,滤液贮于冰箱备用。 2.3 含量测定 在实验条件下,分别注入栀子甙标准使用液0,4,8,12,16 μl,进行HPLC分析,然后以峰面积对栀子甙浓度作标准曲线。再注入5 μl供试品处理液,进行HPLC分析,取其峰面积与标准比较,测得样品中栀子甙含量。 3 实验结果 本实验栀子甙的检测限为3.2 μg/ml,栀子黄色素浓度在0.15~0.25 g/kg范围内,回收率为 91.3%,相对标准差(RSD)%: 1.6%。 参 考 文 献 [1] 沈荣光.山栀子中栀子苷、栀子黄色素的分离、纯化及栀子苷的结构鉴定.江南大学,2006. [2] 谢凤霞,邱祖民,涂盛辉,谢心亮.吸附树脂AB-8精制栀子黄色素的工艺研究.南昌大学学报(工科版),2005,01. [3] 谢凤霞,邱祖民,涂盛辉,等.浸提法与超声波提取法提取栀子黄色素的比较.南昌大学学报(理科版),2005,03. [4] 姚中铭.天然色素栀子黄提取、精制工艺及稳定性的研究.天津轻工业学院,2000. [5] 刘华钢,陈燕军,毛健.高效液相色谱法测定清火栀麦片中栀子苷的含量.中草药,1998,12. [6] 周飞