miR396在落叶松体细胞胚胎中的功能研究 - 林业科学研究.PDF

林业科学研究　２０１６，２９（２）：２２７ ２３３ ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ 　　文章编号：１００１１４９８（２０１６）０２０２２７０７ ｍｉＲ３９６在落叶松体细胞胚胎中的功能研究 １ ２ ２ １ 肖　霞 ，张立峰 ，齐力旺 ，韩素英 （１．中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所，北京　１０００９１； ２．中国林业科学研究院林业研究所细胞生物学实验室，北京　１０００９１） 摘要：［目的］探讨ｍｉＲ３９６在落叶松体细胞胚胎发生中的功能。以期该研究能为解决体胚发育中子叶畸形胚与生 根率低的问题提供新的视角，同时也为进一步揭示体胚发育的分子调控网络做基础铺垫。［方法］构建ｐｒｅｍｉＲ３９６ 超表达载体，通过农杆菌介导侵染，将ｐｒｅｍｉＲ３９６转入落叶松胚性细胞中，筛选稳定抗性细胞系。在ＤＮＡ与ＲＮＡ 水平上，对抗性细胞系进行的鉴定、检测，同时统计比对其与野生细胞系间发芽率、叶片数目以及生根率的差异。 ［结果］在抗性细胞系基因组中，扩增出ＨＴＰ与ｍｉＲ３９６的特异性片段，且无农杆菌 Ｖｉｒｇ基因片段。ＲＮＡ表达水平 上，抗性系ｐｒｅｍｉＲ３９６与ｍｉＲ３９６表达皆增加，而靶基因ＬａＧＲＦｓ的表达量下调。统计表明抗性系胚的发芽率、生根 率、叶片数目畸形率分别为７０．６０％、０．６０％、３７％，而野生型分别为９２．５０％、１０．５５％、４％，抗性系胚的发芽率、生根 率显著降低（Ｓｉｇ．＝０．０００），叶片数目畸形率显著增加（Ｓｉｇ．＝０．０００）。［结论］ｍｉＲ３９６在落叶松体细胞胚胎发生过 程中，可能通过负调节靶基因ＬａＧＲＦｓ的表达或者通过ＬａＧＲＦｓ影响与它相互作用的基因，参与体胚子叶原基细胞代 谢，从而影响了子叶与叶片的发育；通过负调节ＬａＧＲＦｓ或者其它与根部发育相关的靶基因，影响了根端分生区细胞 的活动，参与调控根的发育。 关键词：落叶松，体细胞胚胎，转基因，ｍｉＲ３９６，生长调节因子，发芽率，生根率，叶片数目 中图分类号：Ｓ７９１２２ 文献标识码：Ａ ＦｕｎｃｔｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｍｉＲ３９６ｉｎＳｏｍａｔｉｃＥｍｂｒｙｏｓｏｆＬａｒｉｘｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓ １ ２ ２ １ ＸＩＡＯＸｉａ，ＺＨＡＮＧＬｉｆｅｎｇ，ＱＩＬｉｗａｎｇ，ＨＡＮＳｕｙｉｎｇ （１．ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｒｅｓｔＥｃｏｌｏｇｙ，ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｎｄＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００９１，Ｃｈｉｎａ； ２．ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００９１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：［Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ］ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｍｉＲ３９６ｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎＬａｒｉｘｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓ， ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅａｎｅｗｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｆｏｒｓｏｌｖｅｔｈｅｐｒｏｂｌｅｍｏｆａｂｎｏｒｍａｌｃｏｔｙｌｅｄｏｎｅｍｂｒｙｏｓｏｃｃｕｒｒｉｎｇｉｎｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｄｅ ｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｌｏｗｒｏｏｔｉｎｇｒａｔｅ．Ｉｔｉｓａｌｓｏｐｒｏｐｏｓｅｄｔｏｌａｙａｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｓｔｕｄｙｏｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｎｅｔ ｗｏｒｋｏｆｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．［Ｍｅｔｈｏｄ］Ａｐｒｅ－ｍｉＲ３９６ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｎｄｉｎｓｅｒｔｅｄｉｎｔｏ ｔｈｅｓｏｍａｔｉｃｃｅｌｌｓｏｆＬ．ｌｅｐｔｏｌｅｐｉｓｔｈｒｏｕｇｈａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅｎｔｈｅｃｅｌｌｓｉｎｆｅｃｔｅｄｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｕｎｔｉｌｓ