高效液相色谱仪考察氢溴酸高乌甲素分散片的溶出度.docxVIP

高效液相色谱仪考察氢溴酸高乌甲素分散片的溶出度 1 仪器与试药 Waters 600 高效液相色谱仪、Waters 2487 紫外检测器; ZRS-8 智能药物溶出仪、; 氢溴酸高乌甲素对照品(、批号: 100289-200902) ，氢溴酸高乌甲素分散片( 自制，规格: 每片5 mg，批号:090601， 090602， 090603) ，氢溴酸高乌甲素片( 、规格: 每片5 mg，批号:0812280) ，甲醇( 色谱纯、 ) ，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2． 1 色谱条件 色谱柱: Diamonsil C18柱( 250 mm×4． 6 mm，5 μm) ; 流动相: 0． 05 mol·L-1 磷酸二氢钠-甲醇( 28∶72) ; 柱温: 25 ℃; 检测波长: 252 nm; 流速:1． 0 mL·min-1 ; 进样体积: 20 μL。 2． 2 检测波长的选择 精密称取氢溴酸高乌甲素对照品适量，用流动相制成每毫升约含20 μg 的溶液，以流动相为空白于200 ～ 400 nm 波长扫描。结果对照品在221， 252，309 nm 处有吸收峰。考虑到221 nm 靠近末端吸收，309 nm 波长处峰值较低，因此选择波长252 nm为检测波长。 2． 3 色谱条件的选择及系统适用性 参考氢溴酸高乌甲素含量和有关物质研究的色谱条件进行实验，选用18柱( 250 mm × 4． 6 mm，5 μm ) ，以0． 05 mol·L-1磷酸二氢钠溶液-甲醇( 28∶72) 为流动相，结果主峰峰形对称，理论板数＞1 500，主峰与邻近峰的分离度＞1． 5。故选择此色谱条件。 2． 4 溶出转速的选择 采用小杯法，以100 mL 水为溶剂，考察转速分别为100，50 r·min-1时的溶出情况，结果50 r·min-1， 10 min 时溶出即＞80%，说明氢溴酸高乌甲素分散片溶出较快，故选择50 r·min-1较合适。 2． 5 溶出介质的选择 照溶出度测定法( 《中华人民共和国药典》2010 年版二部附录X C 第三法) ，转速为50 r·min-1，分别选择水、0． 1 mol·L-1 盐酸、磷酸盐缓冲液( pH6． 8) 3 种溶出介质进行考察，结果在3 种溶出介质中的溶出行为相似，无明显差别。因此选择水为氢溴酸高乌甲素分散片的溶出介质。 2． 6 滤膜吸附的考察 分别采用滤膜( 孔径0． 45 μm) 过滤和离心( 3 000 r·min-1 ) 两种方式处理溶出液，结果两种方式处理的峰面积十分相近，说明采用滤膜( 孔径0． 45 μm) 过滤不会对主药产生吸附，而滤膜过滤较离心法简单易行，因此采用滤膜过滤法处理样品。 2． 7 溶出度方法验证 2． 7． 1 系统适用性考察 称取氢溴酸高乌甲素分散片细粉适量，用水配制成每毫升约含氢溴酸高乌甲素50 μg 的溶液，取20 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图。结果主峰峰形对称，理论板数＞1 500; 与邻近峰分离度＞1． 5，已完全分离。另取氢溴酸高乌甲素对照品溶液，连续进样5 次，每次20 μL，记录色谱图，计算各峰面积的RSD，考察本色谱系统的重复性。结果连续进样5 次的峰面积RSD 为0． 65% ( ＜1． 0%) ，说明本色谱系统重复性很好。 2． 7． 2 专属性考察 分别称取氢溴酸高乌甲素对照品、氢溴酸高乌甲素分散片细粉、空白辅料适量，用水配制成每毫升约含氢溴酸高乌甲素50 μg 的溶液，取20 μL 注入液相色谱仪，记录色谱图( 图1) 。结果空白辅料约在3． 1 min 出现较小的辅料峰，但与主峰相距甚远，对溶出度测定无干扰。说明所选择的溶出度测定方法专属性较好。 2． 7． 3 溶出液稳定性考察 取专属性项下的样品溶液，分别于室温下放置0，2，4，6，12， 24 h 后，取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，结果各时间点的峰面积RSD 为1． 35% ( ＜2． 0%) ，说明本品溶出液的稳定性较好，至少在24 h 内稳定。 2． 7． 4 线性关系考察 精密称取氢溴酸高乌甲素对照品12． 2 mg，置25 mL 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备溶液。分别精密量取贮备溶液0． 2，0． 5，0． 8，1． 0，1． 2，1． 5 mL 置10 mL 量瓶中，用水稀释至刻度，配制成浓度分别为9． 76，24． 40，39． 04，48． 80， 58． 56， 73． 20 μg·mL-1 的溶液。分别取上述溶液20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度为横坐标，主峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程为Y = 19 583X－14 259( r = 0． 999 7) 。氢溴酸高乌甲素在9． 76 ～ 73．