非洲爪蟾孵化酶分子对卵黄膜作用方式的研究.pdf

维普资讯 动 物 学 研 究 1998。19{6)：422~428 CN53一lo40／Q tSSN0254—5853 Z帅-0 caIResearch 午 麟 非洲爪蟾孵化酶分子对卵黄膜作用方式的研究 ①①(山东东大大学学生命科学黧学院发育育j生物学研究所济济南南250100) (@ 日本北海道大学理学部生物科学专攻 札幌 060 日本) 摘 要 非洲爪螗 (Xenopu z0如)的孵化液对卵黄膜和二甲基酪蛋白具有降解活性。用 非洲爪螗孵化酶的特异性抗GST—UVS．2抗体进行Western杂交的结果表明，孵化踱中出现一 种分子量为60kD的大组分，有时也会出现一种分子量为40kD的小组分。含有大组分的酶样 品具有很强的卵黄膜溶解活性 ，而只含有小组分的酶样品没有卵黄膜溶解活性 ，尽管二者具有 几乎完全相同的蛋白酶活性。一系列卵黄膜溶解活性分析的结果表明，小组分孵化酶也参与了 对VE的降解，但它对卵黄膜的成功溶解需要大组分孵化酶的协助。大组分孵化酶中的CUB重 复区对卵黄膜的分子结构具有识别或修饰作用，正是这种识别或修饰作用才使小组分孵化酶溶 解卵黄膜成为可能。 关键词 jE巫垫一疆±L薜，目鏖鎏犀蓦鞋，g星重量堕 中围分类号 e59．53 非洲爪蟾早期胚胎的孵化是借助于孵化酶 (hatchingenzyme，HE)来完成的，它能部 分降解受精膜和胶层 (Carroll等，1974；Yoshizaki等，1991)。Urch等 (1981)曾分离出 此酶．但 由于胚胎产生该酶的量极少，而未能对其作出详细鉴定。Sato等 (1990)在非洲 爪蟾中成功地克隆了uvs．2 (cDNA名称．uterine-eggvltellineenvelopesoluble的缩写) 基因，它特异性地存在于非洲爪蟾孵化胚胎头背部的孵化腺细胞中，后来又在孵化腺细胞 中检测出了其转录产物和翻译产物，且这些产物随着孵化过程的结束而逐渐消失。非洲爪 蟾HE cDNA的全序列已被测定，且根据克隆出的该酶的cDNA全序列确定了该酶的一级 结构 (Kat~giri等，1997)。最近，我们制备出了抗GsT (glutathione-S-transferase，谷胱 甘肽s转移酶)一uvs．2抗体 (由GST—uvs．2融合蛋 白的基因工程产品制备)；在利 用该特异性抗体作为探针进一步分离非洲爪蟾HE 时，我们发现了对卵黄膜 (vitellineen— velope，vE)作用方式不同的两种非洲爪蟾HE 分子。根据本实验中所得到的关于这两种 HE的实验结果，提出了有关非洲爪蟾HE 溶解 vE的分子机制。 1 材料与方法 1．1 实验动物 雌、雄非洲爪蟾由本实验室人工饲养。 1．2 主要试剂 兔抗GS，r—UVS．2抗体由本实验室 自制；Superdex75HR10／30凝胶过滤柱，Mono 奉文 1998—02—16收到，1998—07—02修回 维普资讯 6期 樊廷俊等：非洲爪螗孵化酶分子对卵黄膜作用方式的研究 QHR5／5阴离子交换柱 (phannada)；纤维素转移膜 (imn~bilon-P．millipore)；辣根过 氧化物酶标记的羊抗兔 IgG (H十L)(z}aned) 所用化学试剂均为分析纯。 1．3 胚胎的获得 性成熟的非洲爪蟾用 HCG (humanchorionicgonadotropin，人绒毛膜促性腺激素)诱 导排卵，人工受精后所得胚胎悬浮于 1／10Steinberg液 (Steinberg液：58nmlol／LNaCI， 0．57mmol／LKCI，0．34mmol／LCa(NO3)，，0．85n~no!／LMeCi々，4．6mmol／LTris HCI，pH7．4)中，24℃通气培养。胚胎的发育时期根据Nieuwkoop等 (1967)的发育时 间表来确定 。 1．4 孵化液的制备 发育至第 20～22期的胚胎用2．5％硫糖酸钠 (pH8．3)脱