HPLC法测定青霉素V钾片含量.doc

HPLC法测定青霉素V钾片含量【摘要】目的：采用HPLC法测定青霉素V钾片的含量。方法：应用Alltech C18 柱（150 mm×4.6 mm，ID），以水-甲醇（30∶70）为流动相，检测波长268 nm。结果：青霉素V钾浓度在0.10~2.50 mgml-1范围内，峰面积与进样量呈良好线形关系，相关系数r=0.9998，回收率为100.1%，RSD 1.53%。结论：本方法准确、简便、专属性好，可作为该制剂的含量测定方法。 【关键词】高效液相色谱法；青霉素V钾；含量测定 文章编号：1009-5519（2007）13-1918-02中图分类号：R9文献标识码：A 为了测定青霉素V钾的含量，并且使检验过程简单，而又能更好地控制药品的质量，建立并拟定了一种新的HPLC法，测定其含量。 1实验材料 TU-1901双光束分光光度计（北京普析通用仪器公司），SP8800HPLC仪，SP4400积分仪，SP100检测器，AlltechC18柱（150 mm×4.6 mm，5 ?滋m）；青霉素V钾对照品（中国药品生物制品检定所，批号200102），甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯，青霉素V钾片为市售品。 2方法和结果 2.1色谱条件：色谱柱Altech ODS色谱柱（150 mm×4.6 mm，5 ?滋m），流动相水∶甲醇（30∶70），流速１.0 ml/min，波长268 nm，柱温为室温，进样量10 ?滋l。在以上条件下，青霉素V钾对照溶液和供试品溶液的色谱图见图1。 2.2标准曲线的制备：称取青霉素V钾对照品约70 mg，置25 ml容量瓶中，加流动相制成2.8 mg/ml对照品溶液。精密量取对照品溶液1.0 ml置50 ml量瓶中，再精密量取对照品溶液2.0ml，5.0 ml，10 ml分别置25 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀；精密吸取上述5种浓度的对照品溶液10 ?滋l进样，以青霉素V钾浓度（Y）对样品峰面积(X)做回归分析，得回归方程：Y=0.0047+2.4589×10-6X，r=0.9 998。实验结果表明，当青霉素V钾浓度在0.10～2.50 mgml-1范围内，与样品峰面积呈良好线形关系。 2.3精密度实验：取同一批供试品溶液连续进样5次，以峰面积考察其进样精密度，RSD%=0.53。 2.4回收实验：精密称取已知含量（1.147、1.147、0.899、0.899、1.116、1.116 mg）的青霉素V钾片6份，分别精密加入(0.631、0.631、1.262、1.262、0.316、0.316 mg)的对照品溶液，按样品含量测定项下方法，计算回收率，回收率分别为99.63%、101.91%、98.27%、99.03%、102.03%和99.87%平均回收率为100.12%，RSD%=1.53。 2.5重复性试验：取同一批供试品5份，按样品测定项下方法测定，含量平均值为98.8%，RSD%=0.9。 2.6样品的测定：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于青霉素V钾60 mg），置100 ml量瓶中，加流动相适量，充分振摇，使溶解并稀释至刻度，滤过，弃取初滤液，按上述色谱条件测定其含量，同时采用2000年版药典方法测定其含量[1]，即取本品细粉适量（相当于青霉素V钾0.15 g），置250 ml量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，精密量取续滤液5 ml，置100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，再精密量取5 ml，置25 ml量瓶中，加咪唑溶液至刻度，摇匀，置60 ℃水浴中加热30分钟，取出冷至室温，照分光光度法，在325 nm的波长处测定吸收度；另取青霉素V对照品，同法测定计算，结果见表1。 注：两种方法经双侧t检验，P0.05。 3讨论 《中国药典》2000年版采用咪唑-汞盐形成法测定其含量，由于要精咪唑，同时要使用苯，对人体有毒，且易污染环境，而且要在一定的酸性环境条件下定量反应，因此对实验要求高，关于青霉素V钾的HPLC测定，已有报道，但其测定波长为254 nm，但在254 nm波长的紫外吸收小，故样品溶液浓度高，易造成前沿峰，而且其流动相中加有醋酸，会使青霉素V钾在酸性环境中发生降解，从而对测定结果产生影响。本文采用甲醇-水为流动相[2]，在该流动相中，在268、272 nm处有最大吸收，但前者的灵敏度比后者高，故选择检测波长为268 nm，同时，该流动相几乎中性，故青霉素V钾在这种流动相中更稳定，同时也避免了使用易损害仪器的磷酸盐缓冲液和昂贵的乙腈。实验结果表明；方法的回收率高，重现性好，方法简便，数据稳定，可用于本品的质量控制。 参考文献： [1]国家药典委员会.中