RP―HPLC法测定感冒止咳糖浆中绿原酸含量.doc

RP―HPLC法测定感冒止咳糖浆中绿原酸含量摘要：目的：建立测定感冒止咳糖浆中绿原酸含量的HPLC方法。方法：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm，5tan)柱；流动相：甲醇―水―冰醋酸(20:80:1)；流速：1.0mLmin-1；检测波长：327nm。结果：绿原酸在0.077～0，387mgmL-1。范围内呈良好的线性关系(r＝0.9999)，平均回收率为99.8％(n＝6)，RSD＝0.34％。结论：本法操作简单、灵敏、准确，可用于感冒止咳糖浆的质量控制。 关键词：RP-HPLC；感冒止咳糖浆；绿原酸；含量测定 中图分类号：R927.2　文献标识码：A 文章编号：1007--2349(2009)09--0065--02 感冒止咳糖浆有清热解毒，止咳化痰的功效。可用于感冒或流感发热，头痛等症。其质量标准收载于卫生部颁标准第三册。方中金银花有清热解毒的作用，其中的抗菌主要有效成分绿原酸标准中未进行定量控制，本研究采用高效液相法对感冒止咳糖浆中绿原酸进行含量测定，试验结果表明所建的方法简便，结果准确，可行，为更好确保药品的质量提供了可靠的检测依据。 1　仪器与试药 美国Agilent1100高效液相色谱仪，紫外检测器，塞多利斯电子天平BP211D(德国)。甲醇(色谱纯，Fisher，USA)，冰醋酸(分析纯)，去离子水。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110753--200212)，感冒止咳糖浆(均购自云南各大药店)。 2　方法与结果 2，1色谱条件及系统适用性试验色谱柱：Agilent ZORB-AX Eclipse XDB-C18(150mm×4.6mm，5μm)柱；流动相：甲醇一水一冰醋酸(20:80:1)；流速：1.0mLmin-1；检测波长：327 nm；柱温：30℃；进样量：10μL；理论塔板数以绿原酸计大于5000；在此条件下绿原酸和样品中其他物质可以得到良好的分离，分离度2＞2.5，阴性样品无干扰。见图1。 2，2对照品储备液的制备 精密称取绿原酸对照品15.47mg，置10mL量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得1.547 mgmL-1对照品储备液。 2，3供试品溶液的制备精密量取样品2mL，置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。 2，4阴性样品溶液按样品处方比例制备不含金银花的阴性样品溶液，照上述供试品溶液的制备方法制成阴性样品溶液。2，5线性关系的考察精密吸取上述对照品储备液0，5，1.0，1.5，2.0，2.5mL于10mL量瓶中，用50％甲醇溶液配成浓度为0.077，0.155，0.232，0.310，0.387 mgmL-1的对照品溶液，摇匀；分别吸取上述5份对照品溶液10μL进样，按“2.1，，色谱条件测定，以进样浓度为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)，进行线性回归，得回归方程：y=30905x―79(r＝0.9999)。结果表明绿原酸在0.077～0.387 mgmL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2，6精密度试验取上述“2.5”项对照品溶液系列中浓度为0.232 mgmL18-1的溶液按上述色谱条件重复进样6次，测定峰面积，RSD=0.32％(n=6)。 2，7重复性试验取上述供试品溶液，按“2.1”色谱条件，重复进样6次，测定其峰面积，并计算样品溶液中绿原酸的含量，绿原酸平均含量为0.355mgmL-1(n＝6)，其RSD为0.37％。 2，8加样回收率试验精密称取已知含量样品(含量：0.355mgmL-1)6份，分别精密加含绿原酸0.155mgmL-1。的对照品溶液2mL，按“2.3”项下方法制成所需溶液，在“2.1”色谱条件下进行含量测定，计算回收率，结果见表1。 2，9样品测定取不同批号(4批)样品，按“2.3”项下方法制备所需的供试品溶液，在“2.1”色谱条件下，测定其峰面积(每批平行测定3份)，样品中绿原酸的含量，结果见表2。 3　小结 根据对绿原酸对照品扫描结果在327nm处有最大吸收，因此选择327nm波长测定。试验过程中曾比较不同流动相甲醇一水一冰醋酸(20:80:1)，乙腈―0.4％磷酸溶液(13:87)(2005版中国药典条件)，结果证明采用甲醇一水一冰醋酸(20:80:1)作为流动相的样品分离度及理论板数更好。 1