一种新型全白细胞分离液研制.doc

一种新型全白细胞分离液研制[摘要] 目的：为了有效地分离、提取外周血全白细胞，研制一种新型的细胞分离液。方法：右旋糖苷（聚蔗糖）和泛影葡胺按不同比例混合配制成四种比重、五种渗透压的分离液。通过对50例正常外周血的分离摸索出最佳全白细胞分离液的比重和渗透压。结果：最佳全白细胞分离液的比重为1.112 g/ml，渗透压为520 mOsm/L。结论：我们自制的全白细胞分离液提取细胞浓度及细胞纯度高，细胞组分全，细胞比例正常，细胞形态及细胞活性保持良好。同时全白细胞分离液还可以进行其他细胞分离，为相关学科的研究提供了一种有效的细胞分离新方法。 [关键词] 白细胞；全白细胞分离液 [中图分类号]R446.11 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）06（a）-023-03 Research on a novel leukocytes separation liquid SUN Li-li1, ZHAO Yu-jie2 (1.Shenyang Maternal and Child Health Institute, Shenyang 110000, China; 2.China Medical University, Shenyang 110000, China) [Abstract] Objective: In order to isolate and purify efficiently human leukocytes subpopulations from peripheral blood, we have prepared a new liquid separation. Methods: Dextran(Ficoll) and Hypaque were mixed in different proportions to four gravity and five osmotic pressure of separation liquid. By isolated 50 normal peripheral blood,we groped the best gravity and osmotic pressure. Results: Dextran(Ficoll)-Hypaque with density of 1.112 g/ml and osmolarity of 520 mOsm/L was the best results.Conclusion: White blood cells(WBC) are isolated by the novel liquid separation whose concentration and purity are high. It concluded all components of WBC, and its proportion is normal, cells shape and viability remain good. At the same time, the cell liquid separation can also isolate the other cells which create a new type of cell isolation methods for the research in many areas. [Key words] White blood cells; Novel liquid separation 从全血中分离和纯化白细胞是许多生物学和医学应用中的基本方法，它被广泛应用于包括骨髓移植患者巨细胞病毒感染的早期诊断和白血病免疫分型的诊断等许多方面[1，2]。它不仅是许多生物学实验的第一步，也是至关重要的一步，因为后续研究成果的可信度很大程度上取决于分离白细胞的活性与纯度。因此本实验在既往细胞分离方法的基础上做了改进，根据等密度梯度离心原理，通过改变细胞分离液比重及渗透压自制了一种全白细胞分离液，经过我们反复的实验摸索以期达到一次性分离全白细胞的目的。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1实验标本正常人外周血取材于中国医科大学附属第一医院及沈阳急救中心。 1.1.2试剂及主要仪器主要试剂：复方泛影葡胺注射液购于上海旭东海普药业有限公司,右旋糖苷500购于深圳化学产品公司，聚蔗糖400购于天津聚合科技有限公司，其他试剂均为分析纯。主要仪器：低温离心机（SIGMA,USA），Olympus显微镜，血细胞分析仪（Coulter, USA）。 1.2方法 1.2.1 全白细胞分离液的配制第一种Dextran全白细胞分离液：9%右旋糖苷和14.0