免疫印迹法检测164例结缔组织病患者抗ENA抗体结果研究.doc

免疫印迹法检测164例结缔组织病患者抗ENA抗体结果研究【中图分类号】R446.62 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)10－0229－01 【摘要】目的 了解免疫印迹法检测可提取性核抗原 (ENA)多肽抗体方法在临床诊断中的价值。方法 应用免疫印迹法 (IBT)检测 164例结缔组织病 (CTD)患者和 85例非结缔组织病对照血清ENA多肽抗体。结果 CTD中用IBT法测抗ENA抗体阳性109例，占66.5%；SLE患者中，抗Sm阳性率为46.7%，而在其他组中均未检出；DM/PM患者中抗Jo-1阳性率为22.2%；PSS患者中抗SCL-70阳性率为62,5%；各组结缔组织病血清中均检出2种或2种以上的自身抗体。结论 IBT法检测抗ENA抗体具有高特异性、敏感性，对提高结缔组织病自身抗体检出率具有重要价值。 【关键词】免疫印迹法；结缔组织病； ENA抗体 ENA 抗体是针对核内可提取核抗原(extractable nuclear antigen，ENA)的一种自身抗体，主要出现在风湿性疾病患者血清中，对于结缔组织疾病的诊断和鉴别诊断很有价值, 在临床实验室已成为常规检测项目。ENA抗体检测方法有免疫印迹技术（IBT）、对流免疫电泳法（CIE）、酶联免疫测定法（ELISA）和免疫双向扩散法（ID）。我们应用IBT法对164例SLE等结缔组织病和85例非结缔组织病人的血清标本进行了抗ENA抗体检测，结果报告如下：? 1 材料与方法 1.1 病例来源 来自我院2010年1月至12月门诊及住院各种风湿性疾病164例，皆为我院风湿科医生按国际诊断标准确诊的病例，包括SLE 120例、SCLE 23例、DM/PM 9例、 PSS 8例、SS 4例，其中女性141例，男性23例。同时设85例健康人对照，人群来自高考体检学生。 1.2 标本采集 均为上午空腹采血，血清分离后置4℃冰箱保存，一周内完成检测。 1.3 IBT法原理 将ENA抗原经十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)后，蛋白多肽即按分子量大小分离并转移至硝酸纤维素膜上，然后与相应的抗体反应而呈现各种不同的条带。根据显色带的数量与分子量检测其相应的抗体，可同时检出抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗SSB、抗SCL-70、抗Jo-1、抗Rib等7种抗体。ENA多肽抗体谱试剂盒购自广州万孚技术有限生物公司，严格按操作规程操作。? 2 结果 IBT法对85例健康人血清测定结果均为阴性。CTD患者的血清抗ENA抗体谱检测结果见附表。CTD中用IBT法测抗ENA抗体阳性109例，占66.5%；SLE患者中，抗Sm阳性率为46.7%，而在其他组中均未检出；DM/PM患者中抗Jo-1阳性率为22.2%；PSS患者中抗SCL-70阳性率为62,5%；各组结缔组织病血清中均检出2种或2中以上的自身抗体。? 3 讨论 结缔组织病是一种常见的自身免疫性疾病，患者体内可产生多种针对细胞核成分的抗体，其中抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗SSB、抗SCL-70、抗J0-1、抗Rib几种自身抗体是临床上常用的诊断自身免疫性疾病的指标。IBT法可以检测上述抗体，而CIE法目前只能检测前四种。 我们在抗ENA抗体的检测中, IBT法在CTD患者中阳性率为66.5%，而85例非CTD患者检测结果均阴性，由此可见抗ENA抗体检测对CTD的诊断有较高特异性和敏感性。首先，在硝酸纤维薄膜上固定有ENA，可以用不同分子量显色条带指定特异的抗原及其对应的抗体，来确定抗原特异性；其次，IBT法综合了聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨率、生物分子技术的高灵敏度，从而提高了检测的敏感性。 抗Sm抗体仅发现于SLE患者血清中，是SLE的一个标记性抗体??［1］?。本次试验中，120例SLE患者血清中，其阳性检出率为46.7%。Francoeur??［2］?等发现Rib抗体是SLE的特异抗体，阳性率5%~20%，国内周渭珩等报道为15%??［3］?，我们的实验中15%的SLE患者抗Rib抗体阳性，与国内外报道大致相同。在9例DM/PM患者中，抗Jo-1抗体阳性2例，阳性率22.2%。SCL-70抗体是PSS的特异性标志抗体，在8例PSS患者中SCL-70阳性5例，阳性率62.5%。 总之，IBT法有较高的特异性和敏感性，能在一次检测中,同时完成对多种抗体的识别和过筛，从而为临床诊断与鉴别多种自身免疫性疾病提供了更多的实验室依据。但其也有显色效果差，识别较困难的局限性，会带来漏诊和假阳性??［4］?。如果能够和CIE法同时检测，可以进行相互补充，从而提高自身抗体的检出率??［3］?。 参考文献? ［1］ 蒋明，陈永铭.风湿病