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冰冻甘油法在谱细胞保存中应用[摘要]目的：延长谱细胞的有效期。方法：采用冰冻甘油保存法，并对谱细胞进行冰冻前、甘油冰冻后1年抗原稳定性和完整性比较试验。结果：保存1年，抗原稳定性和完整性未见改变。结论：谱细胞的冰冻甘油保存法延长了谱细胞的保存时间。 [关键词]谱细胞；冰冻；甘油；稳定性；完整性 [中图分类号]R446 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2007）07（c）-124-02 抗原稳定性和完整性不变是谱细胞保存的质量要求。谱细胞按说明书保存在2～8℃，保存期为3个半月，但是随着工作中的使用，不断从冰箱取出，不到保存期就失效，即抗原稳定性和完整性受到影响。采用冰冻甘油保存的方法，将谱细胞分装后冰冻甘油保存，用时取出，不再放回冰箱，这样谱细胞的保存期延长至1年仍保持其抗原稳定性和完整性不变。 1 资料与方法 1.1 设备与试剂 1.1.1 设备日本久保田KA-2200型离心机，海尔 BD-96冰柜。 1.1.2 试剂复方甘油、9%NaCl、0.9%NaCl（北京博德桑特输采血器材科技开发中心），谱细胞、抗-M、抗-N、抗-P1(上海市血液中心)，抗-D、抗-C、抗-E、抗-c、抗-e（BaSo公司产品），抗-Jka、抗-Jkb、、抗-S、抗-s、抗-Mur、抗-Fya、抗-Dia、抗-Dib、抗-k、抗-Lea、抗-Leb（美国Gamma公司）。 1.2 操作方法[1] 1.2.1 甘油化将购买的谱细胞分装于试管中，每管0.5 ml（每管分装量依需要而定），做好标记，往各管中加入复方甘油1 ml，封口，混匀，室温放置30 min。 1.2.2 冰冻将甘油谱细胞置于-20℃冰柜中保存。 1.2.3 解冻使用时取出，于37℃水浴箱中慢慢摇动使其融化。 1.2.4 洗涤在解冻后的谱细胞中加入9％NaCl溶液0.5 ml，平衡2 min后再加入0.9％NaCl溶液3 ml，混匀，离心1 min(1 000 r/min)，去除上清；加入0.9％NaCl溶液3 ml混匀，平衡2 min后离心1 min(1 000 r/min)，去除上清；加入0.9％NaCl溶液3ml混匀，离心1 min(1 000 r/min)，去除上清；加入0.9％NaCl溶液配成适宜浓度的细胞悬液供抗体鉴定使用。 1.3 谱细胞抗原稳定性和完整性试验 冰冻前取试管190只，每种抗血清10支试管，分别标上1~10号及抗血清名称，往试管中加入对应抗血清各2滴，1~10号谱细胞各1滴，用抗人球蛋白法试验。冰冻1年重复冰冻前步骤，但所加入的谱细胞为冰冻1年解冻洗涤后配成的细胞悬液。 2 结果 冰冻前、冰冻1年的谱细胞与对应抗血清的反应强度没有改变，说明抗原性稳定；阳性反应个数没有减少，说明抗原性完整。由此可知，谱细胞冰冻甘油保存后其质量没有改变，仍可作为试剂细胞使用。冰冻前的谱细胞与抗血清反应结果见表1。冰冻1年的谱细胞与抗血清反应结果与表1相同。 3 讨论 甘油可应用于临床的红细胞冷冻保护剂。因为甘油具有无毒、中性、分子量小、与水结合力强等特点，对红细胞膜具有良好的保护作用。甘油对红细胞的保护作用主要是由它本身的物理化学性质决定的。甘油分子量小，能自由进入细胞内与水牢固结合，使水溶液的结晶点明显降低，加强了过冷倾向，因而控制了结晶过程，使结晶过程进行缓慢或形成无结晶凝固。另外，甘油与水结合后，增加了盐溶液的容积，使电解质浓度降低，因此，减少或避免了膜脂蛋白复合物变性和磷脂丢失，以防止红细胞的冷冻损伤[2]。 谱细胞的质量要求及应用：①O型，RH系统和主要血型系统抗原已知的健康成人红细胞。DAT试验阴性，2％~5％红细胞悬液。②8人份以上组成，每瓶为单人份红细胞。③能鉴定出临床最常见的有临床意义的同种异型抗体：抗-D、抗-E、抗-Fy等。这些在出厂时已符合质量要求。用于抗体鉴定的细胞试剂，在有效期内，应保持其抗原性稳定和完整[3]。谱细胞保存期为三个半月，本试验中冰冻甘油保存1年后的谱细胞仍保持其抗原稳定性和完整性，所以可以继续作为抗体鉴定的细胞使用。 [参考文献] [1]邹文涛，梁兵，田兆嵩.冰冻红细胞的制备方法、质量研究及临床应用[J].中国输血杂志，2006，19（3）：254-257. [2]李勇，杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术[M].北京：中国科学技术出版社，1999.224-233. [3]王培华.输血技术学[M].第2版.北京：人民卫生出版社，2002.190. (收稿日期:2007-05-16) “本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文”