尿炎消冲剂对细菌性前列腺炎大鼠细胞凋亡影响.doc

尿炎消冲剂对细菌性前列腺炎大鼠细胞凋亡影响1 实验材料 1.1 实验动物 Wista健康雄性大鼠72只，体重250～300g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。 1.2 实验药物 尿炎消冲剂，由黑龙江中医药大学附属慢性病门诊提供，黑卫药制字（1997）第0026号；美满霉素：批准文号：（96）卫药准字X―196（1）号，由惠氏―百宫制药有限公司生产。 1.3 实验试剂与造模细菌 原位细胞凋亡检测试剂由德国宝灵曼公司生产；标准大肠杆菌，由黑龙江中医药大学微生物教研室提供。 2 实验方法 2.1 动物分组、造模方法 造模前经一周适应性饲养，将72只大鼠随机分为4组，分别为空白对照组、模型对照组、美满霉素阳性对照组、尿炎消冲剂组，每组18只，除空白组，其余3组全部造模。每只大鼠分别进行乙醚麻醉。麻醉成功后，固定大鼠四肢于固定板上，剪去大鼠下腹部的毛，在下腹部前列腺体表部碘酒、酒精常规消毒。于大鼠尿生殖隔上方，腹中线行约1.5cm大小纵形切口，切口达腹腔，用镊子轻轻提起膀胱及两侧精囊，暴露附于精囊内侧的前列腺背叶，在两侧前列腺背叶包膜下分别注射预先配制好的大肠肝菌菌液各0.05ml（大肠杆菌含量1×10??7?/ml）。回纳前列腺以原位，全层缝合腹壁肌肉、皮肤后，酒精棉球擦净切口表面血迹，造模结束。用消毒纱布包扎，放回鼠笼，均自由饮食饲养。 2.2 给药方法 造模一周后，开始按下述剂量给药：空白对照组和模型对照组给予生理盐水10ml/kg，灌胃，一日一次；阳性对照组给药剂量为美满霉素0.018g/kg，临用前用蒸馏水配制成的混悬液，灌胃，一日一次；冲剂组给予尿炎消冲剂，剂量为0.6g/kg，用蒸馏水配制成混悬液，灌胃，一日一次；各组给药时间均连续35天，每日观察其活动、进食等情况，35天后处死动物进行相关指标的检测。 2.3 实验方法 闭合颈椎脱臼处死，立刻在无菌条件下剖开腹腔，暴露前列腺体，取背侧左叶组织，尽快投入4%多聚甲醛溶液中固定，待作细胞凋亡检测。前列腺组织切片，原位末端标记测细胞凋亡：石蜡切片厚度5μm，裱于用防脱片剂APES处理过的载玻片上，置45℃温箱烤片24小时。切片常规脱蜡至水。磷酸缓冲液（PBS0.01mol,PH7.4）冲洗5分钟/次×2。滴加蛋白酶K，消化5分钟，PBS冲洗5分钟/次×2。吸干切片周围水分，滴0.3H2O2室温15分钟以灭活内源性酶，PBS冲洗5分钟/次×2。吸干切片周围水分，滴加末端标记酶置37℃水浴30分钟，PBS冲洗5分钟/次×3。滴加抗荧光抗体，置37℃水浴30分钟，PBS冲洗5分钟/次×3。DAB显色10分钟，蒸馏水洗。甲基绿复染10分钟，蒸馏水洗。正丁醇脱水×3。二甲苯透明×2。树脂胶封固。显微镜观察。 2.4 统计方法 所有数据以均数±标准差（±s）表示，进行方t检验，进行比较。 3 实验结果 3.1 实验大鼠的一般情况 造模后各组大鼠均有不同程度的摄食减少，精神萎靡，毛发枯黄，缺乏光泽，上述情况在一周后逐渐恢复正常。 3.2 细胞凋亡观察结果 空白组：基本未见异常，偶见凋亡细胞。模型组：腺上皮细胞大量凋亡，可见深棕黄色凋亡小体，小体之间界限清楚，上皮屏障破坏，腺腔形状不规则，少量核碎片，见到少量炎细胞。尿炎消冲剂组：见在前列腺组织上皮和间质散在分布少量凋亡细胞和小体，上皮细胞体积基本正常，腺腔大，未见炎细胞，前列腺上皮间断分布深棕黄色凋亡小体，小体之间界限清楚，上皮厚度较好，上皮屏障存在。美满霉素组：上皮可见不连续的凋亡细胞，屏障被破坏，见少量凋亡小体，散在分布在前列腺组织上皮和间质，上皮细胞体积基本正常，腺腔大。 4讨论 近年来，细胞凋亡与慢性炎症的关系日益受到重视。细胞凋亡是指在生理情况下机体自我选择和控制的积极主动的“细胞自杀”过程，即程序性细胞死亡(PCD)，表现为细胞凋亡的形态学特征，是近年来医学研究的热点。细胞死亡一般分为两种形式：坏死和凋亡。坏死是细胞受到损害时出现肿胀、破裂，细胞内容物释放到周围环境中引发一系列炎症反应的病理过程。而细胞凋亡是一种由基因控制的，以维持组织自身稳定的生理性死亡过程，它可以完整地清除机体内“多余”细胞，对维持机体细胞功能稳定方面起着关键性作用[1,2]。在某些病理情况下，一旦出现细胞死亡，就无法逆转。因此，不可避免地对机体造成严重的损害；同样，细胞凋亡失控，如某些细胞过早或延迟凋亡也会对机体造成严重的损害[3]。当前对PCD研究的重大进展是，发现其不仅是发育过程中的一种现象，而且见于多种病理状态。细胞凋亡有重要的生理和病理意义。凋亡作为生理过程有确保正常生长发育，维持内环境稳定，发挥积极的防御功能。