杜仲药材含量测定方法探究研究.doc

杜仲药材含量测定方法探究研究【摘要】目的：对中国药典中杜仲药材的含量多种测定方法进行研究与分析。方法：利用HPLC法测定松脂醇二葡萄糖苷的含量为指标，采用多因素筛选药物的渐变提取方法，并进行了方法学验证。结果： 用体积分数50%的甲醇为提取溶剂，提取时间为40min，超声直接提取药材即可达到准确快速便捷的测定目的。结论： 杜仲药材可用甲醇作为提取溶剂，超声处理40min,以乙腈-0.5%甲酸的水溶液（12:88）作流动相测定含量，方法简便实用。 【关键词】杜仲；松脂醇二葡萄糖苷；测定方法 杜仲是杜仲科植物杜仲的干燥树皮，为常用滋补药材，具有补肝肾、强筋骨、安胎、降压的功效[1]。2005年版中国药典中表明杜仲药材的含量方法较为复杂，处理过程繁琐，费时。本实验通过多因素筛选药物的方法的对比验证，找出明确杜仲药材的最佳提取条件，现报告如下： 1材料与方法 1.1材料松脂醇二葡萄糖苷对照品，乙腈，纯净水及分析纯试剂。仪器选用高效液相色谱仪，电子分析天平，超声波清洗器。其中高效液相色谱仪色谱条件为：色谱柱，ZORBAX Eclipse XDB-C18(250mmX4.6mm,5μm);流动相：乙腈-0.5% 甲酸（12:88）；检测波长：277nm；柱温：40°C。对照品溶液制备：取松脂醇二葡萄糖苷对照品3.58mg，加甲醇定容于25mL量瓶中，制成每1mL含0.1432mg的溶液，摇匀备用。 1.2方法与结果采取3种不同的方法制备样品：①药典法，取杜仲药材3g, 揉碎成絮状，用精密取2g，放入索氏提取器中，加入三氯甲烷，再放入索氏提取器中，加入甲醇适量，加热回流6h，提取液回收甲醇至适量，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，后测定。②取杜仲药材3g, 将其揉碎成絮状，用精密取2g，放入索氏提取器中，加入三氯甲烷，加热回流6h，弃去三氯甲烷液，分别精密加入体积分数50%甲醇50ml，称定质量，超声处理40min,放至室温，再继续称质量，用体积分数50%甲醇补足，摇匀，滤过，后测定。③取杜仲药材2.0g，分别精密加入体积分数50%甲醇50ml，称定质量，超声处理40min,放至室温，再继续称质量，用体积分数50%甲醇补足，摇匀，滤过，后测定。结果同批药材质量无统计学差异[1]。选取方法3提取。 不同体积分数的甲醇提取对杜仲药材含量的影响：取杜仲药材2.0g，分别精密加入体积分数40%，50%，60%，70%甲醇各50ml，称定质量；用相同体积分数甲醇补足，摇匀，滤过，后测定见表1.综合各种因素，用体积分数50%的甲醇作为提取最经济适用。 表1.不同体积分数甲醇提取松脂醇二葡萄糖苷 线性范围：吸取松脂醇二葡萄糖苷溶液（0.1432gg-1）2，4,6,8，10和12μL，以峰面积对浓度绘制标准曲线，计算线性回归方程。结果表明在0.286~1.718μgf范围内，对照品峰面积值与进样量呈良好的线性关系。 精密度试验：以密度为0.2032mgmL的对照品溶液连续进样6次，以峰面积计算精密度，平均峰面积为335.94，RSD为0.81%，表明仪器精密度良好。 重现性和稳定性试验：取杜仲粗粉共6份，按③的方法制备样品溶液，测得PDG的平均含量为0.1068%，RSD为1.62%，表明方法重复性良好。另按③方法制备样品溶液，在0、2、4、8、10、24h进样，测得RSD为0.1%，表明样品溶液在24h内稳定性良好[2]。 含量测定：选取三组不同来源的杜仲药材的样品，按照③的方法进行制备，测定，结果见表2. 表2 杜仲中松脂醇二葡萄糖苷含量测定结果 2讨论 杜仲成分复杂，活性成分单体的提取分离困难，通常采取水或甲醇、乙醇等有机溶剂提取。通过试验表明，当甲醇体积分数低于50%时，超声提取率随溶液浓度的升高而增加；当提取溶剂的体积分数高于50%时，含量增加不显著。虽然在同等条件下乙醇较经济安全，但考虑到试验中甲醇提取率比乙醇高，以50%的甲醇作为提取溶剂最佳。 杜仲药材的提取最佳条件是在体积分数50%甲醇为提取溶剂，提取时间为40min。该方法与中国药典2005年版一部的前处理方法做对比试验[3]，含量无显著变化。 试验表明此方法可作为杜仲原料及药品常规、便捷、准确的检测方法。 参考文献 [1].李晔,刘峰.李彤晖.辛永洁.杜仲药材含量测定方法的研究[J].西北药学杂志.2010,5(25):348-350 [2].张倩茹.肖清.HPLC法测定杜仲及其相关制剂中松脂醇二葡萄糖苷的含量[J].遵义医学院学报.2009,4（32）:338-340 [3].中国药典，2005年版[s].一部.2005:114 注：本文中所涉