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游泳池水中尿素两种测定方法比较
游泳池水中尿素两种测定方法比较国家标准规定的测定游泳池水中尿素的方法是二乙酰一肟法(GB/T 18204.29-2000)[1],但该法的产物遇光褪色[2],因此目前有的实验室试用脲酶法检测游泳水中的尿素。为了解脲酶法是否能够达到国家规定的检测标准,我们进行了以下实验。
1 材料和方法
1.1试剂
1.1.1 二乙酰一肟法所用试剂均按GB/T 18204.29-2000配制。
1.1.2 脲酶法试剂系采用卫生部上海生物制品研究所的尿素测定试剂盒。内含4种试剂:①脲酶(冻干):临用前加23.0ml pH8.0缓冲溶液溶解。②pH8.0缓冲溶液:由乙二胺四乙酸二钠盐和磷酸氢二钾组成。③显色剂Ⅰ:由苯酚和亚硝基铁氰化钠组成。④显色剂Ⅱ:由氢氧化钠和安替福民组成。
1.1.3尿素标准储备液(100mg/L) 准确称取0.1000g尿素于小烧杯中,加入少量纯水溶解后转入1000ml容量瓶中,加0.1ml三氯甲烷并用纯水定容,此溶液每毫升含100μg尿素,冷藏保存。
1.1.4尿素标准使用液(10mg/L)准确吸取尿素标准储备液(100mg/L)10.0ml于100ml容量瓶中,用纯水定容,此溶液每毫升含10μg尿素。
1.2 主要仪器 7230G型分光光度计(上海分析仪器厂)
1.3 实验方法
1.3.1 二乙酰一肟法 严格按GB/T18204.29-2000 规范操作。
1.3.2脲酶法吸取1.00ml水样于10ml比色管中,另取10ml比色管9支,分别加入10mg/L尿素标准使用液0.0,0.1,0.3 ,0.5,0.7,0.9,1.1,1.3,1.5ml,向水样和标准系列中分别加入脲酶溶液0.5ml,混匀,于37℃水浴中保温15分钟,然后向各管分别加入显色剂Ⅰ显色剂Ⅱ各2.5ml,混匀,定容至10ml,再于37℃水浴中保温20分钟取出,冷却至室温,于550nm波长下,1cm比色杯,空白调零读取各管吸光度。
2结果
2.1标准曲线比较二乙酰一肟法作为国标推荐方法,已经成熟,线性方程x=0.003105y+0.001065,相关系数γ=0.9994。脲酶法经本实验测定,在0~20mg/L范围内线性良好,线性方程x=0.009125y+0.008136,相关系数γ=0.9991。
2.2 精密度比较取三组不同浓度的水样分别测定7次,两种方法所得结果相对偏差均小于5%,说明两种方法有教高的精密度(表1)。
表1分析方法的精密度
样品号尿素含量
mg/L测定值RSD%
二乙酰一肟法脲酶法二乙酰一肟法脲酶法
10.200.180.183.223.22
20.400.390.423.432.82
31.000.980.994.143.80
准确度比较取10个不同水样加入不同的尿素标准,用两种方法分别测定,计算回收率,结果见表2。
表2分析方法的准确度
样品号样品量
mg/L加标量
mg/L测定值回收率(%)
二乙酰一肟法脲酶法二乙酰一肟法脲酶法
10.710.501.161.2390104
20.650.501.101.129094
30.790.501.301.2710296
42.151.003.153.1010095
52.801.003.723.789298
62.621.003.533.539191
73.151.004.104.089593
87.112.009.009.0394.596
97.832.009.939.7510596
107.612.009.589.6098.599.5
对比实验 分别取13个样品,用两种方法测定,其结果经统计软件计算,P0.05,两种方法无显著性差异,见表3。
表3 两种测定方法的比较结果
12345678910111213
二乙酰一肟法0.887.353.413.744.055.505.261.122.395.155.012.310.61
脲酶法0.987.203.553.604.265.325.440.952.504.905.232.450.78
3讨论
二乙酰一肟法的优点在于方法已经成熟,应用广泛,精密度好,且是目前唯一直接化学分析尿素的方法[2]。缺点是煮沸时间长,反应不稳定,需用棕色比色管,产物遇光褪色。二乙酰一肟及安替比林保存时间短,最好现用现配。而脲酶法却能克服二乙酰一肟法的缺点,且该法具有良好的线性,灵敏度高,精密度好,不需要避光操作和煮沸。采用脲酶法的本实验数据可以得出基本达到国家标准要求的结论,但它毕竟不是国标,一旦遇纠纷,还
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