硒化壳聚糖促创面愈合作用体内探究.doc

硒化壳聚糖促创面愈合作用体内探究[摘要]目的：研究硒化壳聚糖软膏促浅Ⅱ度烫伤小鼠创面愈合的作用。方法：147只昆明种小鼠随机分为硒化壳聚糖软膏治疗组、基质治疗组和京万红治疗组，每组49只，采用将脱毛区置于70℃恒温水浴中6s的方法制成10%体表面积浅Ⅱ度烫伤模型，伤情经病理切片证实。各组创面分别用硒化壳聚糖软膏纱布（1ml/cm2）、基质纱布（1ml/cm2）、京万红纱布（1ml/cm2）覆盖包扎固定后放回笼中饲养，换药1次/天，观察愈合时间，于伤后12h，第1、3、5、7和9天，分别处死各组小鼠7只，检测含水量、羟脯氨酸、TNF、NO、ALT，另取7只做为正常对照。结果：①创面愈合时间：硒化壳聚糖软膏组为（12.9±2.9）天、基质组为（16.3±2.1）天、京万红组为（11.8±2.4）天，硒化壳聚糖软膏组比基质组明显缩短（P Key words: selenium chitosan cream; superficial second degree burn; hydroxyproline; TNF-α; NO 硒化壳聚糖[1]是将壳聚糖与亚硒酸在酸性条件下，以混合金属离子为催化剂，通过拼合原理制备而成的有机硒，前期研究结果显示，硒化壳聚糖可显著促进体外培养的人皮肤成纤维细胞和表皮细胞增殖，且无明显毒副作用[2-3]，这为进一步将硒化壳聚糖开发成促创伤愈合药奠定了基础。硒化壳聚糖软膏是以硒化壳聚糖为主制备而成的软膏剂[4]，为评价其体内作用效果，笔者在小鼠身上复制浅Ⅱ度烫伤模型，观察了硒化壳聚糖软膏用于治疗烫伤的疗效并探讨了可能的作用机制。 1 材料和方法 1.1 药品试剂与仪器：谷丙转氨酶（ALT）、L－羟脯氨酸试剂盒、一氧化氮（NO）、血肌酐（Crea）、肿瘤坏死因子（TNF）试剂盒（南京建成生物工程公司）；京万红软膏（天津达仁堂制药二厂，批号211556）；UV-Vis 9200分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；HH－2型数显恒温水浴锅（国华电器公司）；Medal680酶标仪（美国Bio－Rad公司）；昆明种3月龄小鼠，我院实验动物中心提供，许可证号SCXK（鄂）2006-2009。 1.2方法 1.2.1硒化壳聚糖软膏制备：参见文献[4]。 1.2.2动物模型制作[5]：参照文献[5]方法将小鼠背部用8%的Na2S水溶液脱毛，脱毛后适应1天，禁食，乙醚麻醉，脱毛区放入70℃恒温水浴中6s，制备10%浅Ⅱ度烫伤模型。造模成功以肉眼可见创缘环绕一白色边界线，与创面周围正常皮肤形成明显的分界，病理切片见真皮乳头层有明显充血、水肿和白细胞浸润，胶原纤维肿胀、离散。将烫伤小鼠随机分为3组，即硒化壳聚糖软膏组（A）、不含硒化壳聚糖固体分散剂和冰片的空白基质组（B）、京万红组（C），每组49只，另取7只小鼠不烫伤，作为正常对照组。 1.2.3给药方法：各组小鼠分别外用硒化壳聚糖软膏纱布（1ml/cm2）、基质纱布（1ml/cm2）、京万红纱布（1ml/cm2）覆盖，包扎固定后分笼饲养，每日换药一次。 1.2.4检测指标：在伤后12h，第1、3、5、7和9天，分别处死各组小鼠7只，取标本检测创面含水量、创面羟脯氨酸含量、创面组织TNF-α水平、NO含量和ALT活性，每组中所剩7只用于观测创面愈合时间，即创面瘢痕完全脱落所需时间。创面含水量测定[6]：处死小鼠后，取创面组织约1g，称重，放入80℃烤箱中，烘烤72h后称重，组织含水量＝（湿重－干重）/湿重×100%。羟脯氨酸含量测定参见文献[7]方法。TNF-α、NO、ALT按试剂盒说明检测。 1.2.5统计学处理：所获数据均以x±s表示，应用SPSS 13.0统计软件进行方差分析，组间、组内比较采用ANOVA分析。 2 结果 2.1 创面愈合时间 A组小鼠创面愈合平均时间为(12.9±2.9)天，与B组平均时间16.3±2.1天明显减少，有统计学意义（P0.05）。 2.2 创面组织含水量 各组小鼠烫伤后创面组织含水量均较空白对照组显著增高，伤后12h达到高峰，其后开始下降。伤后第1、3、5天A组的小鼠创面含水量显著低于B组（P0.05），第7天以后各组小鼠创面含水量则没有显著差异,见表1。 2.3创面组织TNF-α水平各组烫伤后小鼠创面组织TNF-α水平均高于烫伤前的正常水平（P0.05），见表3。 2.5创面羟脯氨酸含量烫伤后小鼠创面羟脯氨酸含量进行性增加，但从烫伤后第3天起，A组小鼠羟脯氨酸含量增加速度明显加快，各对应时相点羟脯氨酸含量均显著高于B组和C组（P0.05），伤后各时相点A组ALT水平与B组和C组比较亦无显著性差异（P0.05）,见表5。 3 讨论