乳制品中L-羟脯氨酸的检测.PDF

  乳制品中L‐羟脯氨酸的检测  1 前言  “皮革奶”的主要添加物“皮革水解物的主要成分是皮革水解蛋白（即为动 物皮毛，含大量角质蛋白质），而劣质水解蛋白的生产原料主要来自制革工厂的 边角废料。制革边角废料中含有重铬酸钾和重铬酸钠，用这种原料生产水解蛋白， 重铬酸钾和重铬酸钠自然就被带入产品中，被人体吸收。食品专家介绍，皮革水 解物主要添加的食品是乳与乳制品及含乳饮料，作用是增加蛋白质含量。  主要检测方法是检查牛奶中是否含有 L-羟脯氨酸，这是动物胶原蛋白中的特有 成分，在乳酪蛋白中则没有，所以一旦验出，则可认为含有皮革水解蛋白。 本实验提供了乳制品中 L-羟脯氨酸的检测方法，采用 DNFB 柱前衍生法进行分 析测定。  2 仪器配置与试剂  2.1 仪器、前处理设备及试剂盒配置  表1 L-羟脯氨酸检测标准配置 序号 名称 订货号 1 P1201 高压二元梯度系统 2 氨基酸分析专用色谱柱 3 氨基酸专用保护柱 4 氨基酸试剂盒 5 L-羟脯氨酸标准品 1      表2 氨基酸试剂盒组分表 序号 名称 1 氨基酸衍生化溶液 2 衍生缓冲固体组分A 3 衍生缓冲固体组分B 4 平衡缓冲固体组分A 5 平衡缓冲固体组分B 6 流动相B 固体组分 表3 前处理设备配置 序号 名称 1 恒温水浴锅 2 氮吹仪 3 溶剂过滤装置 4 流动相超声装置 5 烘箱 6 0.45μm针孔式微孔滤膜 7 5mL水解用安瓿瓶 8 封口膜 2.2 其他  25mL棕色容量瓶、50mL棕色容量瓶、移液枪、移液枪枪头、一次性PVC手套、 一次性口罩、氮气瓶、2mL塑料离心管、进样针等。 2.3 试剂及相关溶液配制  2.3.1 衍生缓冲溶液  称取衍生缓冲液固体组分A 1.24g ，固体组分B 7.63g ，加入至500mL量瓶中，定容并 2      摇匀后备用。 2.3.2 平衡缓冲溶液  称取平衡缓冲液固体组分A 0.91g，固体组分B 3.58g，加入至250mL量瓶中，定容并 摇匀后备用。   2.3.3 羟脯氨酸标准溶液  将羟脯氨酸标准品用衍生缓冲溶液定容至250mL容量瓶中，备用。 2.3.4 流动相A  乙腈-水（1:1），相同体积的乙腈与水混合，超声脱气10～15min。 2.3.5 流动相B  称取流动相B