谈维生素C对甘油三酯(TG)测定结果干扰.docVIP

谈维生素C对甘油三酯(TG)测定结果干扰近年来，在临床生物化学检验中，酶比色测定法的应用越来越广泛。许多项目的测定都使用工具酶参与的反应，常用的是利用葡萄糖氧化酶、胆固醇氧化酶、甘油氧化酶等测定葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯等的酶法Trinder反应，即H2O2偶联过氧化物酶反应。是利用较高特异性的氧化酶产生过氧化氢(H2O2)，再加氧化发色剂比色。该酶法的单试剂一步终点法，操作简便、快速准确、微量、试剂稳定，在半自动生化分析仪上的使用更是普及。但在实际工作中，却存在一些物质对该反应的干扰，给测定结果带来一定的分析误差。本文作者对一定浓度的维生素C对氧化酶(GPO)法测定甘油三酯(TG)做干扰试验，讨论维生素C对Trinder反应的干扰。 1 测定原理[1] 2 试剂与仪器 2.1血清标本 收集浓度约为2.30mmol/L无肝炎病毒、无溶血、无脂浊的人的TG，混合血清。 2.2 维生素C标准液(5.68mmol/L)取规格为5ml：1g的维生素C(分子量为176.13)注射液1支，加蒸馏水稀释至1000ml。 2.3 其他试剂上海玉兰生物技术有限公司生产的甘油三酯GPO-PAP法单试剂检测试剂盒。 2.4 仪器 赛诺迈德(中国)SBA-730半自动生化分析仪。 3 试验方法[2] 3.1 样品制备 ①基础样品血清0.9ml+蒸馏水0.1ml；②干扰样品I 血清0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.05ml＋蒸馏水0.05ml；③干扰样品Ⅱ血清0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.06ml+蒸馏水0.04 ml；④干扰样品Ⅲ血清0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.07 ml+蒸馏水0.03 ml；⑤干扰样品Ⅳ：血清0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.08 ml+蒸馏水0.02ml；⑥干扰样品Ⅴ 血清0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.09ml+蒸馏水0.01 ml；⑦干扰样品Ⅵ血清0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.1ml；⑧维生素C样品蒸馏水0.9ml+5.68mmol/L，维生素C，标准液0.1ml。 3.2 甘油三酯值测定取各样品按GPO-PAP法单试剂检测试剂盒说明书操作。 3.3 计算干扰物加入值(mmol/L)＝干扰物溶液浓度× 3.4 计算结果（表1）。 4 结果与讨论 4.1 在此酶法的Trinder反应中，由于过氧化物酶(POD)的特异性较差，还原性物质维生素C可以和氧化酶(GPO)反应生成的H2O2发生反应，即与色原性物质竞争H2O2，产生竞争性抑制，消耗反应过程中产生的H2O2，使部分H2O2不能参与POD的偶联反应，从而降低显色程度，使测定结果偏低，产生负的测定误差。从试验结果可以看出，维生素C对GPO法测定TG结果有负干扰。 4.2 干扰试验是用于测定某物质加到样品中所产生的恒定系统误差，干扰值即偏差 (Bias)。根据我国卫生部临床检验中心推荐使用美国CLIA’88允许偏倚范围TC为靶值±25％的标准，TC在医学决定水平(Xc)为2.30mmol/L时的允许偏差(EA)为0.58mmol/L。与之比较在该干扰试验中，当血清中维生素C的浓度达到0.511mmol/L时，对TC的干扰率为29.4％，偏差(Bias)为0.59mmol/L、Bias大于EA有统计学意义，表明血清中维生素C浓度达到0.511mmol/L。以上时，对该反应产生干扰所引起的偏差会对临床检验结果有影响。 4.3 由于在实际工作中，存在着临床用药对某些检验结果的干扰，这就要求我们检验工作者在日常的工作中要密切与临床的联系，了解病人的用药情况，改进检验方法，去除干扰，减少误差，确保检验结果的准确。目前双试剂在自动化分析仪的使用，有效解决了维生素C对Trinder反应的干扰这一问题。即在酶法测定葡萄糖、胆固醇、甘油三酯等的试验中，第一试剂中加入维生素C氧化酶。当样品中加入第一试剂后，37℃作用5分钟，可将样品中维生素C分解掉，从而排除了维生素C对Trinder反应的干扰作用。 (收稿日期：2006-05-09) 本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文。 1