畜禽肉中磺胺类药物残留的检验方法.PDFVIP

畜禽肉中磺胺类药物残留的检验方法 食品安全检验手册108 本方法可以检验畜禽肉、鸡蛋中磺胺嘧啶（SD ），磺胺间甲氧嘧啶（SMM ），磺胺 二甲氧嘧啶（SDM ），磺胺二甲嘧啶（SM2 ），磺胺甲噁唑（SMZ）和磺胺喹噁啉（SQ） 的残留。 1. 原理 样品中磺胺类药物经乙腈+三氯甲烷（10V+1V）提取后，又经过液—液分配转入水层进 行净化后，用具紫外检测器的高效液相色谱仪检测，外标法定量。 2. 试剂和材料 以下所用试剂，除特殊说明外，均为分析纯试剂，水为重蒸水。 (1) 乙腈（优级纯，作流动相用）。 (2) 甲醇（优级纯）。 (3) 正己烷。 (4) 三氯甲烷。 (5) 乙腈+三氯甲烷（10V+1V）。 (6) 乙腈+三氯甲烷（2V+1V ）。 (7) 硫酸钠。 (8) 硫酸钠溶液：2%水溶液（m/V ）。 (9) 标准溶液 ①标准储备液：准确称取磺胺嘧啶（SD），磺胺间甲氧嘧啶（SMM ），磺胺二甲氧嘧啶（SDM ）， 磺胺二甲嘧啶（SM2 ），磺胺甲噁唑（SMZ）和磺胺喹噁啉（SQ）各10.0mg，分别用乙腈 溶解，并用乙腈定容至10.0mL。摇匀。即得各1.0mg/mL的标准溶液。 ②混合标准工作液：分别吸取上述溶液各1.0mL于100mL容量瓶中，并用流动相稀释，摇匀。 然后吸取此液0，0.05，0.10，0.25，0.50，1.0mL各放入10mL容量瓶中，各加流动相至刻度， 摇匀，即得含6种磺胺的标准系列溶液。 3. 仪器和设备 (1) 高效液相色谱仪，具紫外检测器。 (2) 超声波发生器。 (3) 涡流混匀器。 (4) 离心机。 (5) 旋转蒸发仪。 4. 测定步骤 (1)试样处理：称取5.0g绞碎后的试样，置于塑料管中，加入约1g硫酸钠，乙腈+三氯甲烷 （10V+1V）20mL ，超声提取15min，2500r/min离心3min，过滤取滤液于蒸发瓶中，残渣再 加乙腈+三氯甲烷（10V+1V）20mL ，超声提取15min，2500r/min离心3min，过滤合并滤液 于蒸发瓶中，于40℃水浴旋转蒸发仪上蒸发至干（如果量大，可分两次蒸）。残渣加入 2.0mL2%硫酸钠水溶液和3.0mL正己烷，在涡流混匀器上剧烈混合，使残渣溶解。转入离心 管中，4000r/min离心3min 。用吸管吸去上层正己烷，并弃去。再用3.0mL正己烷洗水相一次， 同法弃去正己烷。向水相中加入3.0mL乙腈+三氯甲烷混合溶剂（2V+1V ），于涡流混匀器 上剧烈混匀，以使混合溶剂从水相中反提磺胺。用吸管吸去上层液并弃去。下层有机相转入 蒸发瓶中，于40 ℃水浴中旋转蒸发至干。准确加入1.00mL流动相溶解残渣，于涡流混匀器 上混匀3min 。通过0.45μm 的微孔滤膜过滤。滤液作HPLC分析。 （2）测定 ① HPLC参考条件 色谱柱：Grace Smart C18 5μm 250mm × 4.6mm 流动相：甲醇+乙腈+水+乙酸 = 2+2+9+0.02 流速：1.0mL/min 检测波长：270nm 柱温：25℃ ② 标准曲线 依照上述色谱条件，分别进标准工作液各个点。每个标准液进20μL测定其峰面积，然 后以标准液浓度对峰面积作校准曲线，求出回归方程及相关系数。 ③ 样品的测定 在上述色谱条件下，吸取已净化的样品溶液20μL ，进行HPLC分析，测定其峰面积，与 标准比较，根据保留时间定性，外标法峰面积定量。 5. 结果计算 （1）计算：将标准曲线各点的浓度与对应的峰面积进行回归分析，然后按下式分别计算供 试样品中各种磺胺的残留量。 ρ×∨ X （1-75） m 式中：X——样品中磺胺类药物的含量，mg/kg ； Ρ——被测液中磺胺类药物的含量，µg/mL； V——样品定容体积，mL ； m——样品质量，g 。 6. 磺胺类药物色谱图 图 1-84 磺胺类药物色谱图