毕赤酵母表达系统优化策略概述鄢.PDF

中国生物工程杂志摇 悦澡蚤灶葬月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁圆园员缘袁猿缘渊员园冤院愿远鄄怨园 阅韵陨院员园援员猿缘圆猿辕躁援糟遭援圆园员缘员园员猿 毕赤酵母表达系统优化策略概述鄢 傅小蒙摇 孔令聪摇 裴志花摇 刘树明摇 马红霞鄢鄢 渊吉林农业大学动物科学技术学院摇 长春摇 员猿园员员愿冤 摘要摇 毕赤酵母渊孕蚤糟澡蚤葬责葬泽贼燥则冤表达系统是近年发展起来的一种高效表达外源蛋白的系统袁利用 该系统表达外源基因具有良好的应用前景遥 尽管毕赤酵母表达系统具有比较完备的基因表达调 控机制和对真核基因表达产物的加工修饰能力袁但由于基因本身及表达系统等诸多因素袁仍然存 在外源蛋白表达产量很低甚至不表达的情况遥 针对毕赤酵母表达系统这一因素袁对表达载体的 优化袁毕赤酵母菌株优化及发酵条件优化进行了综述袁以期为外源基因在毕赤酵母中的高效表达 提供理论基础遥 关键词摇 毕赤酵母摇 表达载体摇 菌株摇 发酵摇 优化 中图分类号摇 匝苑愿远 摇 摇 毕赤酵母表达系统是美国 砸藻泽藻葬则糟澡 悦燥则责燥则葬贼蚤燥灶 源基因高效表达的关键因素咱源暂 袁毕赤酵母中的转录因 栽藻糟澡灶燥造燥早蚤藻泽公司渊栽怎糟泽燥灶袁粤在冤申请的专利袁近年来袁随 子通过特异的顺势作用元件与启动子相互作用来影响 着高通量基因测序技术的不断发展袁以及两种可利用 基因的转录和表达遥 构建孕粤韵载员 启动子文库袁从中筛 的基因组浏览器 渊酵母菌属基因组数据库 选可提高外源基因表达量的新型启动子袁以及利用启 杂葬糟糟澡葬则燥皂赠糟藻泽 郧藻灶燥皂藻 阅葬贼葬遭葬泽藻袁杂郧阅 咱员暂尧毕赤酵母 动子共表达系统均可以显著提高外源蛋白在毕赤酵母 郧藻灶燥皂藻月则燥憎泽藻则咱圆暂冤的公开袁有多种外源基因在毕赤酵 菌株中的表达产量和质量遥 母中成功获得表达袁毕赤酵母表达系统逐渐成为表达 员援员援员摇 孕粤韵载员启动子的优化摇 通过编译孕粤韵载员 基因 外源蛋白的主导系统之一咱猿暂遥 但是作为新兴的蛋白表 内公认的转录因子结合位点使启动子效率增加袁从而 达系统袁毕赤酵母表达系统仍存在一些缺点袁如院筛选 提高启动子控制之下的外源基因表达量遥 研究者咱缘暂通 药物昂贵尧生产过程使用的甲醇易燃等安全隐患尧糖基 过对已知的孕粤韵载员 启动子序列中转录因子结合位点 化高甘露糖的存在以及发酵周期较长等遥 因此袁毕赤 的删除和重复袁创建启动子文库袁并使用绿色荧光蛋白 酵母表达载体的改进袁糖基人源化工程渊匀怎皂葬灶蚤扎藻凿 渊郧云孕冤 为报告基因来研究启动子文库的特性袁结果显 郧造赠糟燥泽赠造葬贼蚤燥灶耘灶早蚤灶藻藻则蚤灶早冤的研究袁以及发酵条件优化已 示院在抑制袁去抑制和诱导条件下的文库表现出至少员圆 成为推进毕赤酵母表达系统成为强有力的外源蛋白表 种与孕粤韵载员启动子启动基因高表达相关的顺式作用 达工具的重要环节遥 元件袁从该文库中筛选出来的新型启动子可以成功启 动基因的高表达遥 熊向华等咱远暂以人血清白蛋白渊匀杂粤冤 员摇 毕赤酵母表达载体优化 作为报告蛋白袁通过致错孕悦砸构建孕粤韵载员启动子突变 员援员摇 启动子的优化 体袁筛选出毕赤酵母高水平表达菌株袁其摇瓶中 匀杂粤 摇 摇 毕赤酵母中醇氧化酶员基因启动子渊孕粤韵载员冤是外 的表达量由圆园园皂早辕蕴 提高到猿猿缘皂早辕蕴遥 员援员援圆摇 孕粤韵载员 启动子共表达系统的应用摇 应用 收稿日期院圆园员缘鄄园远鄄员缘摇 摇 修回日期院圆园员缘鄄园苑鄄园员 鄢国家自然科学基金渊猿员员源园园圆远冤尧