肌抑素Myostatin突变体Pro区域的克隆、表达和活性.pdf

农业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2004,12 1冤院 56~60 ·研究论文· 肌抑素Myostatin 突变体Pro 区域的克隆、表达和活性* 杨兴元 树洪 侯 健 陈永福** (中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京 100094) 摘要: 为了检测肌抑素Myostatin 突变体的Pro 区域生化活性，设计引物从肌抑素突变的双肌牛皮尔蒙特（Piedmontese ） 的基因组中扩增得到肌抑素突变体的Pro 区域，并 别将其亚克隆到pMD 18-T 载体上。利用基因重组技术，构建原核表达质 粒pET30a(+)/ Myostatin-Pro(简称pEMPro) ，在大肠杆菌（ ）中分泌表达肌抑素突变体Pro 区域,采用亲和层析 法纯化表达产物，并将其共孵育于体外培养的绵羊的骨骼肌细胞。证实肌抑素的突变体Pro 区蛋白具有促进肌肉细胞增殖的 功能. ； ； 关键词: Myostatin Pro 区域 原核表达 肌肉细胞增殖 Cloning and Expression of Pro Domain of Mutation of Myostatin and Its Biochemical Activity YANG Xing-Yuan YANG Shu-Hong HOU Jian CHEN Yong-Fu** (State Key Laboratory for Agrobiotechnology ，China Agricultural University, Beijing 100094, China ） In order to understand the biochemical activity of Pro domain of the bovine myostatin mutation. It was amplified by PCR, and was sub-cloned into the pMD 18-T vector and then was inserted into expression vector pET-30a (+) to form the expression plasmid pET-30a(+)/ Myostatin-Pro. The recombinant plasmid was transfomed into BL2 1. The product of pET-30a (+)/ Myostatin-Pro was highly expressed .The purified pET-30a (+)/ Myostatin-Pro could stimulate the proliferation of sheep muscle cells. Myostatin-Pro domain; prokaryotic expression; proliferation of muscle cells 肌肉生长抑制素又称GDF-8(growth differentia- 报道集中在通过基因打靶和转基因技术，消除和限 tion factor 8), 属TGF- (transforming growth factor 制肌抑素的作用[9，10] ，然而至今未取得重大突破， beta,转化生长因子)超家族。肌肉生长抑制素是在骨 因