鱼腥藻PCC7120基因组中一个影响异形胞发育和图式形成的新区域.PDF

维普资讯 第 28卷 第 1期 水 生 生 物 学 报 Vo1．28．No．1 2004 年 1月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA Jan ．，2004 鱼腥藻 PCC7120基因组中一个影响异形胞发育和图式形成的新区域 宁德刚 徐旭东 (中国科 学院水生生物研究所 ，武汉 430072) 摘要：以Tn5—1087b诱变鱼腥藻PCC7120，筛选不能利用氮气生长 、异形胞图式发生变化的突变株。突变株 }}1801经 缺氮诱导24h后无异形胞形成，48h后沿藻丝形成少量成熟异形胞 ，占藻细胞总数比例为 2．8％，其异形胞发育速度 和形成频率均与野生型有显著区别 。以ClaI酶切该突变株总 DNA、自环化后以电泳冲法转化大肠杆菌 ，回收带有 插入位点两侧 DNA片段的转座子Tn5—1087b。经测序确定转座子位于未知功能基因 altO099第148和149碱基之间。 为证 明突变性状确 由a／rO099内的插入突变引起而不是 由于其他二次突变 ，通过 同源双交换将含新霉素抗性基因 的c．I(2片段定 向插入基因组 中 。1r0099的EcoRV位点，获得重构的鱼腥藻突变株 DR214，其表型与原突变株 #1801 相同。以上结果表 明 。1r0099或其下游基 因是鱼腥藻 PCC7120基 因组 中与异形胞发育和图式形成相关的一个新区 域。 关键词 ：鱼腥藻 ；异形胞；图式；定 向突变 中图分类号 ：Q949．22 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—3207(2004)0001—06 鱼腥藻 (Anabaenasp．)PCC7120是一种丝状 固 诱导几天后异形胞频率明显提高 j。 氮蓝藻 ，在无氮盐条件下一些营养细胞在 24h内分 通过转座子诱变鱼腥藻 PCC7120，作者发现一 化成异形胞并进行固氮作用。异形胞之间一般约间 株异形胞发育速度较慢、频率大为降低 的突变株 。 隔 10个营养细胞 ，形成较有规律的分布图式l1J。从 这种表型与以上图式突变均不同，经基 因定位和定 营养细胞到异形胞 的分化包括诱导、细胞分裂终止 向插入失活证明转座子插入部位是一个影响异形胞 和形态发生几个主要阶段 。在形态发生过程 中，细 发育和图式形成的新区域。 胞壁外形成双层包被：外面为多糖层 ，可被爱尔新蓝 1 材料与方法 染色 ；里面为糖脂层，是阻挡氧气的物理屏障。这一 复杂的生理过程涉及许多基因共同参与的一个复杂 1．1 藻株培养和接合转移 鱼腥藻 PCC7120来源 的基因调控网络l2J。 于水生所藻种库 (FACHB)，以BG一11培养基在 28— 到 目前为止 ，已发现 多个与异形胞分化相关的 30％条件 下光照 (约 50~E／m／s)静置培养。鱼腥藻 基 因，其 中已确证影响其图式形成的有 5个。在控 突变株在 BG一11中培养时加适当的抗生素。通过接 制异形胞 图式形成的基 因中有促形成基 因，如 hetR 合转移将质粒从大肠杆菌导入蓝藻按文献[8]进行。 是启动分化的必需基 因，过量表达时导致形成连续 1．2 转座子诱变和突变株筛选 将含有 Tn5衍生 异形胞L3j。也有抑制基因，如 patS，在发生缺失突变 转座子的质粒 pRL1087b通过接合转移导入鱼腥藻 时导致成簇异形胞形成 ，并且异形胞之间的营养细 PCC7120中 J，以 10ttg／mL的红霉素 (Era)筛选接合 胞数也减少 [4J；再如 hetN若不 能充分表达则可在 子。待接合子长 出后 ，用牙签挑起在含 5ttg／mL红 48h后