真核生物转录与后加工.ppt

参与转录的物质 原料: NTP（ATP, UTP, GTP, CTP） 模板: DNA 酶: RNA聚合酶（RNA polymerase, RNA-pol） 其他蛋白质因子 真核生物 RNA聚合酶 —— 三种RNA-pol I 、II、III 真核生物的转录过程 （一）转录起始 真核生物的转录起始上游区段比原核生物 多样化，转录起始时，RNA-pol不直接结 合模板DNA，而是借助众多转录因子，其起始过程比原核生物复杂。 真核生物的转录起始是在转录因子(TF)的协助下，RNA聚合酶辨认结合转录起始点上游的DNA序列 (启动子)，生成起始前复合物。 1. 转录起始前的上游区段 顺式作用元件(cis-acting element) 顺式作用元件是指与结构基因串联的特定DNA序列，是转录因子的结合位点，它们通过与转录因子结合而调控基因转录的精确起始和转录效率。 2. 转录因子 能直接或间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，统称为反式作用因子(trans-acting factors)。 反式作用因子中，直接或间接结合RNA聚合酶的，则称为转录因子(trans-criptional factors, TF)。 参与RNA聚合酶Ⅱ转录的转录因子（TF）Ⅱ 3. 转录起始前复合物(pre-initiation complex, PIC) 真核生物RNA-pol不与DNA分子直接结合，而需依靠众多的转录因子。 4. 拼板理论(piecing theory)  一个真核生物基因的转录需要3至5个转录因子。转录因子之间互相结合，生成有活性和专一性的复合物，再与RNA聚合酶搭配而有针对性地结合、转录相应的基因。 （二）转录延长 真核生物转录延长过程与原核生物大致相似，但因有核膜相隔，没有转录与翻译同步的现象。 RNA-pol前移处处都遇上核小体。 转录延长过程中可以观察到核小体移位和解聚现象。 （三）转录终止 终止过程： 酶停止添加底物→→释放RNA链→→酶解离 终止反应…杂合双链的氢键断裂， …重新形成双螺旋，酶的解离。 终止子（terminator）：在转录的过程中，提供转录终止信号的RNA序列 真正起终止作用的是RNA序列，与启动子不同 在细胞内，原初转录产物经过一系列变化转变 为成熟的 RNA分子的过程，称为转录后加工（post- transcriptional processing） 3`-末端多聚腺苷酸的合成 先于剪接加工 poly A polymerase 催化，转录后修饰点序列（AAUAAA）提供信号 一般长度为100~200个腺苷酸 （二）mRNA的剪接 1. hnRNA 和 snRNA hnRNA —— 成熟 mRNA 前身（含非编码内含子） snRNP(small nuclear ribonucleoprotein，小核核糖核蛋白体)—— 由snRNA和核内蛋白质组成，作为RNA剪接场所。 断裂基因(splite gene) 真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因。 2. 外显子(exon)和内含子(intron)  外显子 在断裂基因及其初级转录产物上出现，并表达为成熟RNA的核酸序列。 内含子 隔断基因的线性表达而在剪接过程中被除去的核酸序列。 4. mRNA的剪接 —— 除去hnRNA中的内含子，将外显子连接。 snRNP与hnRNA结合成为并接体。 （1）剪接接口（边界序列） —— 内含子5`-末端的GU和3`-末端AG，也即5` GU??AG-OH 3` 。 （2）剪接体（splicesome）—— 由snRNP与hnRNA结合的复合体。其功能：致内含子形成套索，并使上、下游外显子靠近的。 tRNA的加工分成3个阶段 (1)“斩头”，形成5′末端。RNaseP识别二级结构——发夹所组成的tRNA(外部引导区 )。 (2) 去尾，形成3′-OH末端。由内切酶和外切酶的共同参与。前者识别发夹结构，后者识别CCA序列。 (3)修饰：在前体tRNA的一些专一部位的碱基需要通过甲基化酶，硫醇酶，假尿嘧啶核苷化酶等的作用进行修饰成为特殊的碱基，如氨基酸臂上5′的4-硫尿苷（4tu），D臂上的2甲基鸟苷（2mG），TψC臂上的假尿苷（ψ）以及反密码子环上的2异戊腺苷（2ipA） 三、rRNA的转录后加工 1 . 甲基化 —— 先于切割拼接，主要位置在核糖- 2`-OH 上，约占2%(真核)左右。 真核rRNA甲基化程度比原核的高 2 .rRNA前