药物的体外抗菌药敏.ppt

上课时间: 授课内容:药物的体外抗菌(药敏)试验 课 型: 实验课 授 课 人: 陈杵生 任教班级: 一年级第2学期 课 时:　2节 药用微生物检验技术 教学目标： 1.能说出药物的体外抗菌(药敏)试验在实际工作中的应用情况 2.参照实验讲义能在教师指导提示下进行体外抗菌试验操作 3.正确制备双碟，在无菌条件下放置使用牛津杯并滴加药液 4.能准确的测量记录抑菌圈的大小 5. 能说出药物的体外抗菌(药敏)试验影响因素 教学重点： 制作双碟，无菌操作 教学难点： 制作双碟，滴加药液 一、引入：药敏试验在医院的应用 讲故事：今有一病人，受细菌感染后，门诊医生初期试用了几种常见抗生素，发现不能抑制该菌。抗生素有成百上千种，是不是一种一种药物用在病人身上都是试一遍呢？显然不现实的。在不损害病人元气情况下，怎么样才能知道某种抗生素对特定菌有无效果呢？（学生答）将细菌从病人身上分离培养出来，体外抗菌试验法。 二、课前准备：1、菌种：金黄色葡萄球菌肉汤培养物（老师备好），（1、3、5组）大肠杆菌肉汤培养物（老师备好），（2、4、6组），将肉汤培养物（约18-20h）分装于试管中，各1支（7ml）/组。 2、药物：3种不同待测药液和对照用水（老师备好），将适当浓度配制好的药液及水分装于试管中，各1支（5ml）/组，3种药液分别为抗Ｇ＋、抗Ｇ－和广谱抗生素 3、培养基：营养琼脂培养基，150ml/组。 4、其它：1）灭菌项（老师备好）平皿（8个/组）、陶土盖（8个/组）、牛津杯）（1皿（约32个）/组）2）镊子（4把/组）、标签纸（1皿/组）、模板（2片/组） 1．管碟法的概念 　管碟法是利用抗生素溶液在含敏感试验菌的琼脂培养基内扩散渗透作用形成一定的抑菌圈而设计的。通过琼脂培养基，可观察并测量出抑菌圈的大小。 在一定的抗生素浓度范围内，抗生素的对数浓度(剂量)与抑菌圈的面积或直径成正比。 三、管碟法原理介绍 2．抑菌圈的形成原理将抗生素溶液注入小钢管中，抗生素分子随溶液向培养基内呈放射状扩散。 图 ：抗生素在含试验菌平板上扩散示意图 四、实验内容： （一）本实验设计方案 实验结果有个人的，有小组的（考察同一种试验菌对不同药物的敏感性），有全班的（考察同一药物对不同试验菌的抗菌作用）。 （二）药液的配制 【老师备好】 配制适当浓度的待测药液（3种）和对照用水（配制用水应为无菌蒸馏水）。 各1支试管（约5ml）/组 （三）试验菌的准备 【老师备好】 约18-20h的金黄色葡萄球菌肉汤培养物和大肠杆菌肉汤培养物，各1支（7ml）/组。 抗生素微生物检定法的过程 加陶瓦园盖 培 养 测量抑菌圈 可靠性测验，计算结果 操作步骤： 1 、制备双碟 4、换盖 2 、放置牛津杯 5、培养 3 、滴加药液 6、测量抑菌圈直径 五、实验结果： 观察抑菌圈，并用尺量出抑菌圈直径，按实验设计统计本人、本组、本班的实验结果。 1、药物名称与代号： 2、本人实验结果： 3、本组实验结果： 4、本班实验结果： 六、结论与讨论： 针对实验结果分析讨论： 1、同一种试验菌对不同药物的敏感性。 2、同一种药物对不同试验菌的抗菌作用。 七、思考题： 1、本实验应准备的实验材料具体名称和数量清单？（实验预习） 2、本实验中影响抑菌圈大小的主要因素？ 【总结】学生操作的情况 【作业】完成实验报告 学生扩展：互联网查阅抗菌药物敏感性试验执行标准(2010年中文版) * * * * * * * *