试验24蛙的早期发育.doc

实验24 蛙的早期发育 一、实验目的 1．了解生殖的基础理论，学习蛙的人工催产和受精技术。 2．通过对蛙早期发育的观察，认识动物个体发育的一般过程，从而加深对动物系统演化的理解。 3．学会自己查阅文献、设计实验、分析处理实验数据及实验结果的报告。二、实验材料 1．性成熟的牛蛙、虎纹蛙等人工养殖的蛙类。或在繁殖时期，同学自己在野外采集性成熟的蛙类，如泽蛙等。 2．或性成熟的鱼类。三、实验器具与药品 1．实验器具 由同学根据实验设计自行准备。 2．药品 丙酮、无水酒精、蛙类脑下垂体（PG）、绒毛膜促性腺激素（HCG）、促黄体生成素释放激素类似物（LRH-A）、生理盐水、蒸馏水等。四、实验操作 实验前同学查阅文献资料，做出实验方案设计，完成实验内容。 1．人工催产 （1）不同催产剂组合催产效果的比较。 （2）不同条件催产效果的比较。 2．受精卵的获得 （1）精子悬浮液的制备 杀死或麻醉一只雄蛙，解剖取出精巢，将精巢轻轻地在吸水纸上滚动，除去粘附其上的血液及肠系膜等。将干净的精巢放入小烧杯或培养皿中，捣碎。加入10 mL左右的生理盐水，制成精子悬浮。将乳状悬浮液静置15分钟，激活精子。 （2）采卵 抓住待产雌蛙，使其背部对着手心，手指部分圈住蛙体，并刚好在前肢的后面，手指尖搁在蛙的腹部；另一手抓住并伸展蛙的两后肢（图24-1）。 握蛙手指自蛙体前部开始轻微加压，然后向泄殖腔方向逐渐捏握，卵即可由泄殖孔流出。由于开始时通常会流出泄殖腔液，因此丢弃最初排出的卵粒，擦干泄殖孔周围后，再收集卵于培养皿中。 （3）受精 向盛卵培养皿中加入已制备好的精子悬浮液，摇匀，使精子与卵子充分接触。10-15分钟后倒出精子悬浮液并加入清水，完成受精，得到受精卵。 将受精卵移入盛有清水的培养皿中，并供给充足氧气，观察发育过程。 也可将催产后的雌雄蛙一起放入水簇箱中，让它们自行抱对产卵。但此方法需密切注意观察抱对行为，以便及时采得受精卵。否则难以准确把握受精时间。 3．早期发育的观察 （1）观察记录早期发育过程。 （2）了解影响早期发育的条件因素，并加以分析。 五、作业与思考题 1．试述蛙的催产及人工受精操作要点。 2．不同催产剂组合催产效果的比较分析。 3．绘出蛙类早期发育图。 4．记述蛙类发育时期。附录 （一）蛙脑下垂体的获取与处理 用大剪刀从口角处横向剪断头颅，再用小剪刀从枕骨大孔的两侧插入颅腔，剪开颅骨，将颅底打开，在脑的腹面可见一粉红色颗粒状小体，即为脑下垂体。用尖镊子轻轻将脑下垂体取出，去除周围组织，然后放入盛有丙酮或无水酒精的小广口瓶中脱脂脱水12小时，取出晾干，在阴凉或低温处密封干燥保存备用。经脱脂脱水处理后，亦可更新丙酮或无水酒精中，长期保存备用。 若无备用的脑下垂体，催产时可临时取新鲜的使用。 （二）黑斑蛙正常发育时期表（20±0.1℃） 发育时期 发育阶段 由受精起所需的时间（小时） 1 受精卵 0 2 2-细胞 2.0 ± 0.02 3 4-细胞 2.7 ± 0.09 4 8-细胞 3.3 ± 0.08 5 16-细胞 4.0 ± 0.4 6 32-细胞 4.6 ± 0.3 7 囊胚早期 5.4 ± 0.2 8 囊胚中期 8.4 9 囊胚晚期 12.4 10 原肠胚早期 15.9 ± 0.3 11 原肠胚中期 19.9 ± 0.4 12 原肠胚晚期，卵黄栓 21.7 ± 0.0 13 神经板期 32.4 ± 1.3 14 神经褶期 39.1 ± 1.3 15 胚胎的转动 41.9 ± 1.1 16 神经管期 45.3 ± 0.82 17 尾芽期 49.9 ± 1.9 18 肌肉感应 60.2 ± 1.2 19 孵化 70.4 ± 3.0 20 心跳 79.8 ± 4.7 21 鳃血循环 97.2 ± 6.9 22 开口期 129.9 ± 2.7 23 尾血循环 153.9 ± 4.9 24 鳃盖期 160.4 ± 3.7 25 鳃盖右端合缝 195.5 ± 2.3 26 鳃盖封闭 202.3 ± 5.9 （三）豹蛙胚胎发育（图24-2） 图24-2 豹蛙（Rana pipiens）的胚胎发育（Leland） 1