电针对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗血管纹琥珀酸脱氢酶影响.docVIP

电针对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗血管纹琥珀酸脱氢酶影响康颂建　史献君　史永芝　曾兆麟 (泰山医学院生理听觉研究室,山东271000;1泰山医学院第一教学医院;2上海中医药大学) 摘要将动物随机分成3组:GE组动物肌肉注射庆大霉素,每天80 mg/kg;针刺组肌肉注射庆大霉素同GE组,每天电针双侧”听宫”、”翳风”、”肾俞”穴1次;对照组动物不做任何处理。以脑干听觉诱发电位(BAEP)和琥珀酸脱氢酶(SDH)组织化学检测为指标。结果:对照组BAEP反应阈无明显变化,耳蜗血管纹SDH染色呈紫蓝色;GE组动物BAEP反应阈明显升高,SDH显色变淡或消失;针刺组BAEP反应阈升高幅度及血管纹SDH显色变化明显低于GE组。结论:电针能减轻GE耳毒性;对耳蜗血管纹SDH有保护作用。 主题词耳蜗/酶学琥珀酸脱氢酶/针灸效应庆大霉素类/毒性电针 针刺治疗耳聋是中医学的传统方法,对药物性耳聋的防治作用已有报道,针刺有保护耳蜗酸性磷酸酶、ATP酶和琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase,SDH)活性,对抗氨基糖甙类抗生素耳毒性的作用[1,2]。针刺能否保护耳蜗血管纹SDH的活性,尚未见报道。本实验主要观察电针对庆大霉素(gentamicin,GE)致聋豚鼠耳蜗血管纹细胞SDH变化的影响。 1材料与方法 1.1实验动物分组选用耳郭反射正常,日龄45～65天,平均53天,体重为250～350 g的健康杂色豚鼠(由泰安生物制品研究所动物园提供),雌雄兼用,随机分成3组:GE组10只,每天肌肉注射GE 80 mg/kg体重,连续注射20天;针刺组14只,肌肉注射GE同GE组,每天注射GE后1h给予针刺1次;对照组5只,不做任何处理,只作为耳蜗血管纹SDH的正常对照。 1.2脑干听觉诱发电位测定用固定装置固定豚鼠,测定清醒状态下的豚鼠脑干听觉诱发电位(BAEP)反应阈。用YJC-A型诱发电位仪测定用药前和用药及针刺后(隔5天测1次)BAEP反应阈。用短声刺激,由声刺激器输入波宽为0.1 ms方波电脉冲经EPL-903型耳机输出,10次/s。放大器通频带为80 Hz～3 kHz,增益2000,叠加200次。引导电极置颅顶部,参考电极及接地电极分别置于同侧和对侧乳突部。测定BAEP反应阈以IV波刚出现时的刺激强度dB值为反应阈值。 1.3针刺针刺动物处于清醒状态,用固定装置固定,针刺穴位参照文献报道的实验动物解剖学与人体穴位相应部位[1],取双侧”听宫”、”翳风”和”肾俞”穴,用电针刺激法(用G 6805-1型针刺治疗仪,青岛华声仪器厂产),连续输出,9次/s;刺激强度以针刺周围组织颤动,动物能忍受为宜,持续刺激15 min,每天8时进行针刺,连续针刺20天。 1.4组织化学检测停止用药和针刺后1天,测定耳蜗血管纹SDH。SDH显示采用硝基蓝四氮盐法,染色程序改变为适合于耳蜗组织显色。作用液配方[3]:0.2 mol/L琥珀酸15 ml,0.2 mol/L磷酸盐缓冲液(pH为7.4)15 ml,0.1%硝基蓝四氮盐15 ml,上述各液用时混合即可。染色程序:麻醉动物后处死,立即取耳蜗,迅速在蜗尖部钻孔,并将蜗窗和前庭窗开放,用0 ℃ 60%丙酮液灌流固定,用双蒸馏水灌洗后,再灌流37 ℃作用液,然后将耳蜗置于37 ℃作用液中温育1～2 h。将温育后的耳蜗放于10%磷酸缓冲中性甲醛溶液中固定8 h以上,然后按照耳蜗螺旋韧带硬铺片技术做螺旋韧带铺片[4],光镜下观察耳蜗血管纹SDH的变化。标本染色程度用721型分光光度计(上海第三分析仪器厂产)测定吸光度。各组动物SDH的测定都是在严格控制相同条件下进行的。 2结果 2.1BAEP阈变化GE组和针刺组动物在用药后BAEP反应阈分别都发生不同程度的升高;在用药前和用药后20天比较,都有明显差异。在用药后20天组间比较,GE组升高明显,针刺组升高幅度较小,两组间差异显著(P0.05);对照组动物BAEP反应阈无明显改变(见表1)。 2.2组织化学检测光镜下观察正常豚鼠耳蜗螺旋韧带铺片血管纹细胞和毛细血管壁细胞的SDH显色呈深紫蓝色,分布均匀,血管纹细胞及毛细血管壁均能明显辨认,细胞膜及血管壁边界清楚(见副封1,图1),与文献报道一致[4]。GE组耳聋动物耳蜗血管纹细胞SDH显色明显变淡或消失,部分血管纹细胞膜边界模糊(见副封1,图2),表明血管纹细胞和毛细血管壁细胞SDH活性受到抑制,细胞受到不同程度的损害。针刺组耳聋动物血管纹细胞及毛细血管壁细胞SDH显色亦变淡,但较GE组轻,血管纹细胞及毛细血管壁能清楚辨认(见副封1,图3),表明SDH受到轻度抑制,细胞无明显损害。标本的染色程度用分光光度计测定,吸收波长为450 μm,各组标本的吸