遗传学试验讲义.PDF

遗传学实验讲义 目 录 实验一 植物基因组 DNA 的提取及纯度与含量的测定 ·············2 实验二 根癌农杆菌介导的重组质粒的电击转化 ·····················5 实验三 人类 ABO 血型的调查和分析 ····································8 实验四 人类指纹的分析 ···················································11 实验五 性染色质:人体 X 染色质的标本制备与观察 ·················15 实验六 染色体组型分析 ···················································16 实验七 果蝇的培养、生活史及形态观察 ······························19 实验八 果蝇唾腺染色体标本的制备和观察 ···························24 生物学院 1 实验一 植物基因组DNA 的提取及纯度与含量的测定 一、实验目的 DNA 是遗传信息的载体和基本遗传物质，它在遗传变异、代谢调控等方面起着重要作 用，是分子遗传学和基因工程研究的对象，但无论是研究植物 DNA 的结构和功能，还是开 展外源 DNA 的转化、转导的研究，首先要做的就是从植物组织中提取天然状态的高分子量 的纯化DNA 。因此，本实验的目的是学习植物基因组 DNA 提取方法、原理和 DNA 的鉴定 技术。 Ⅰ 植物基因组 DNA 的提取（SDS 法） 一、原理： 利用含高浓度 SDS 的抽提缓冲液在较高温度（55—65℃）条件下裂解植物细胞，使染 色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后提高盐浓度（KAc ）和降低温度（冰上保温）的 办法沉淀除去蛋白质和多糖（在低温条件下 KAc 与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去 沉淀后，上清液中的 DNA 用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的 DNA 。 二、实验材料、主要仪器和试剂 1. 实验材料：新鲜拟南芥的幼嫩组织或者新鲜菠菜幼嫩组织 2 ．主要仪器 （1）高速冷冻离心机 （2 ）751 型分光光度计 （3 ）恒温水浴 （3 ）液氮、冰浴设备 （4 ）核酸电泳设备 （5 ）凝胶成像系统 3.药品试剂： —— 液氮 20 升 ——新型植物基因组 DNA 的快速提取试剂盒 2 个 —— 异丙醇 1 瓶 500 ML 耗材： 移液枪，15、2.0 、1.5ml 离心管，篮、黄、白枪头各 13 套 离心管架 10 个，离心管盒 2 个，水浴泡沫 10 个，研钵及小药勺 8 套 棉手套，薄膜手套，透明胶布，剪刀 三、操作程序 1. 在 1.5 ml 离心管中加入450μl 的溶液A ，然后加入B-巯基乙醇至终浓度为 0.5% 。（样品 不应该超过 50mg ）,过多样品使得裂解不充分，最终会导致基因组 DNA 提取量减少且纯度 低）。 2.取植物新鲜组织 50mg，加入液氮充分研磨至粉末状。 3. 将研磨好的粉末加到上述预备好的溶液 A 中，65 ℃水浴 20-30 min，期间颠倒混匀样品 数次。 4. 加入 400μl 溶液 B ，常温 5Min, 12, 000 rpm 离心 5 min 。 2 5. 小心将上清转移到一个新离心管中（勿将沉淀吸入，若不小心吸到，可再次离心去除沉 淀），加入 600μl 异丙醇，充分混匀，室温放置 10 min。 6. 12, 000 rpm 离心 10min，小心去上清（勿将DNA 样品的沉淀倒出）。 7. 加入 400μl 溶液 C，颠倒混匀2 次, 12, 000 rpm 离心 5min，弃废液（勿将DNA 样品的沉 淀倒出）。 8. 重复步骤 7 一次。 9. 于室温或 37 ℃敞盖放置 5-10min，至无明显乙醇味。 10. 加入 30-200μl 溶液 D ，离心管中即为基因组DNA 溶液。 Ⅱ 植物 DNA 分子量的测定——琼脂糖凝胶电泳法 一、实验原理 以琼脂糖凝胶为支持介质的电泳广泛应用于核酸