分子生物学与现代中医药学.docVIP

分子生物学与现代中医药学 一． 分子生物学技术在中医方面的应用 1.应用Rt-PCR 技术发现肾阳虚证和下丘脑室旁核促肾上腺皮质激素释放激素(CRF) 的 mRNA 表达受抑, 从而将肾阳虚证定位在下丘脑。 2.活血化瘀方药对血管平滑肌细胞增殖的影响,证明化瘀类中药血管通可抑制血管壁血小板衍化生长因子(PDGF) 基因表达,并可使血管壁原癌基因c-myc的mRNA 表达水平下降,表明活血化瘀药能在细胞和基因水平发挥干预作用。 　3.衰老这一生命现象的变化,是相互联系的多虚实因素综合作用的结果。沈少珩等研究发现老年大鼠肝组织超氧化物歧化酶(SOD) 、过氧化氢酶(CAT) 的活性降低与其酶蛋白的mRNA 表达水平减弱相关,经中药二仙汤及其拆方治疗后, SOD和CAT 活性升高,其mRNA 基因表达水平也随之增强有关。廖柏松等观察了二仙汤对老年前期雌性大鼠下丘脑内阿片肽 含量及其mRNA水平的调节作用,发现二仙汤明显提高老年前期大鼠下丘脑EOP 的基因转录水平(mRNA 水平) 和基因表达水平( EOP 含量) ,向青年鼠水平靠拢。 4.吴志奎等〔20〕认为DNA 甲基化水平的提高可维持基因的正常表达,阻止异常基因(癌基因、衰老基因) 的表达,用HPLC 法分析了生理性肾虚老龄大鼠肝细胞DNA 的甲基化水平,发现神方补肾生血药可明显增高其DNA 的甲基化水平。 二.分子生物学技术用于中医临床研究 1.运用补肾生血药治疗β-地中海贫血,能明显提高β-地中海贫血患者血红蛋白和抗碱血红蛋白,提高血红蛋白珠蛋白链比,通过Rt-PCR 检测,该药能促进γ-珠蛋白的mRNA 基因转录和表达,诱导HbF合成,从而代偿了γ-珠蛋白基因缺陷。 2.王树庆等，杜元才等使用丹参佐以核糖核酸治疗肝硬化腹水,可能与RNA 优先进入肝细胞,在丹参的协同下较持久保持其信息大分子的完整性,改善肝脏微循环及促进肝细胞正常代谢有关。张培宇等使用四君子汤配合RNA ,可从不同角度提高晚期化疗患者的免疫功能,改善人体一般生理状态,并可提高化疗完成率。 3．凌云彪等研究清热活血补益方(肝纤方)对大鼠肝脏Ⅰ型前胶原mRNA 的表达和胶原酶活性的影响。结果表明,以清热活血补益方制备的含药血清抑制了Ⅰ型前胶原mRNA 的表达,胶原酶的活性增加。提示此方抑制Ⅰ型前胶原mRNA 的表达,减少胶原的合成,同时提高胶原酶的活性，促进胶原的降解,可能是其抗肝纤维化的部分机制。 4.柴胡逆转肝细胞癌多药耐药作用与相关机制的研究，多药耐药(M u lt idrug resistance, MDR) 是指细胞可耐受结构、功能及杀伤机制不同的多种药物的致死量. 一旦细胞对某种药物产生耐药性, 即可以同时对多种药物产生耐药性。选用对VCR 天然耐药肝癌细胞株Bel27402 为对象来研究柴胡逆转MDR 效果与相关的机制,其主要机制包括跨膜蛋白从细胞内外排化学药物的功能增加(P2糖蛋白是外排泵机制之一) ; 谷胱甘肽解毒酶的活化; 控制凋亡的基因和蛋白的改变, 如P53 和Bcl22; DNA 拓扑异构酶活性和量的改变. PCR 分析结果表明, 柴胡具有逆转肝细胞癌多药耐药作用, 并与抗癌药物VCR 有协同作用. 柴胡对人肝癌Bel27402 细胞株具有多药耐药逆转作用, 提高了耐药细胞内的VCR 含量,增加了VCR 对细胞G2 期阻滞作用, 抑制了P2170 糖蛋白的表达, 抑制MDR1?m RNA 的表达, 提高了TopoEAmRNA 水平. 三．中药提取物的研究 中药治病的物质基础是通过其所含的生物活性分子来发挥作用的,因此从分子水平对中药有效成分进行中药药理和临床机制的研究,能够进一步提高疗效并找出科学根据。 1.目前研究较多的为黄芪多糖和人参皂甙。运用黄芪多糖(APS) 能使小鼠脏器DNA、RNA 含量明显增加,证明APS 对蛋白质合成是通过RNA 含量影响,促进脏器细胞的蛋白质合成,增强细胞功能,并对防止衰老进程有一定的意义。研究人参皂甙Rb2 对糖尿病大鼠RNA 聚合酶活性的刺激作用,该药能增加聚合酶Ⅰ、Ⅱ活性,增加碳水化合物和类脂类的代谢,增加肝组织中ATP 的含量,提示人参皂甙Rb2 可促进rRNA 和mRNA 的合成。梁华平等研究表明人参茎叶皂甙可拮抗烧伤所致淋巴细胞IL-2 及IL-2R 的基因表达受抑。 2.廖柏松等]采用Northern blot对18月龄雌性大鼠下丘脑内阿片肽的基因表达水平进行研究,结果表明,二仙汤组β-内啡肽前体阿黑皮素原和脑啡肽原的mRNA 水平明显升高,达到未衰老前水平。 3.丹参酮对人肺癌细胞株的增殖抑制作用，丹参酮ⅡA 对SPC-A21 细胞增殖具有显著抑制作用,其分子机理可能是丹参酮ⅡA 能显著上调p53、p21 表达和下调CDKN2 的表达而